The 30 references with contexts in paper G. Skitovich S., N. Shadrova B., O. Pruntova V., K. Serova V., Г. Скитович С., Н. Шадрова Б., О. Прунтова В., К. Серова В. (2018) “ОПТИМИЗАЦИЯ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ГЕНОМА LISTERIA MONOCYTOGENES // REAL-TIME PCR OPTIMIZATION FOR LISTERIA MONOCYTOGENES GENOME DETECTION” / spz:neicon:veterinary:y:2018:i:3:p:63-68

1
Бхуниа А. К. Патогенные микроорганизмы пищевых продуктов. – СПб.: Профессия, 2014. – 342 с.
Total in-text references: 2
  1. In-text reference with the coordinate start=7552
    Prefix
    Листериоз не является широко распространенной инфекцией. По количеству выявленных случаев он значитель­ но уступает сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по тяжести клинического течения и проценту летальных исходов
    Exact
    [1]
    Suffix
    . L. monocytogenes обычно сосуществуют с другими видами этого рода, такими как непатогенная Listeria innocua, которая мо­ жет быть использована в качестве индикатора возмож­ ного присутствия L. monocytogenes в пищевых продук­ тах [15].

  2. In-text reference with the coordinate start=11225
    Prefix
    Основанием для выбора явилось то, что этот белок у L. monocytogenes имеет две уникальные области последовательностей, отсутству­ ющие у других видов листерий, что делает его высоко­ специфичным и подходящим для точной качественной оценки всех штаммов L. monocytogenes
    Exact
    [1]
    Suffix
    . Сравнивая iap­родственные гены разных видов листерий, A. Burbert и соавт. [15] определили общие и переменные области в пределах этих генов, специ­ фичных для каждого из видов Listeria.

2
Васильев Д. А., Ковалева Е. Н., Мастиленко А. В. Идентификация бактерий видов Listeria monocytogenes и Listeria ivanovii методом муль­ типлексной ПЦР в режиме «реального времени» // Биотика. – 2014. – No 1 (1). – С. 3–6.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9250
    Prefix
    В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния
    Exact
    [2, 12, 16, 26, 28]
    Suffix
    . При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

3
Зайцева Е. А. Система анализа микробиологических и молеку­ лярно­генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes: дис. ... д­ра мед. наук. – М., 2010. – 270 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

4
Методические рекомендации по лабораторной диагностике ли­ стериоза животных и людей: утв. начальником ГУВ Госагропрома СССР А. Д. Третьяковым от 13 февраля 1987 г. – URL: http://www.libussr.ru/ doc_ussr/usr_13807.htm (дата обращения: 05.02.18).
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=8192
    Prefix
    Идентификация L. monocytogenes в соответствии с действующими нормативными документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента)
    Exact
    [4, 8]
    Suffix
    . Однако время исследований традиционными ме­ тодами варьирует от 3–4 дней при отрицательном результате, а для подтверждения положительного результата требуется до 7 дней [24]. Обнаружение L. monocytogenes в продуктах животного происхожде­ ния микробиологическим методом затруднено из­за высокой концентрации конкурентоспособной микро­ флоры, низкого уровня L. monocyto

5
Методические указания по выявлению генома Listeria monocytogenes в пищевых продуктах с помощью ПЦР­РВ / А. В. Писку­ нов, О. В. Прунтова; ФГБУ «ВНИИЗЖ». – Владимир, 2013. – 17 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=13074
    Prefix
    На основании проведенного эксперимента опти­ мальной была выбрана температура отжига 57 °С. Оптимизировали концентрации праймеров и зон­ да для специфичного анализа с использованием тех же циклов, что и для разработанного ранее анализа ПЦР­РВ
    Exact
    [5]
    Suffix
    . Оптимальные условия, которые показывают наименьшее значение для порогового цикла (Ct) с наи­ меньшими концентрациями праймеров и зонда (рис. 1), указаны в материалах и методах. Определение чувствительности оптимизированной ПЦР-РВ.

6
Микробиологический анализ мяса, мяса птицы и яйцепродук­ тов: пер. с англ. / под ред. Дж. К. Мида. – СПб.: Профессия, 2008. – 384 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=7913
    Prefix
    L. monocytogenes обычно сосуществуют с другими видами этого рода, такими как непатогенная Listeria innocua, которая мо­ жет быть использована в качестве индикатора возмож­ ного присутствия L. monocytogenes в пищевых продук­ тах [15]. Требования безопасности пищевых продуктов, принятые в большинстве стран, не допускают наличия L. monocytogenes
    Exact
    [6, 18]
    Suffix
    . Идентификация L. monocytogenes в соответствии с действующими нормативными документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента) [4, 8].

7
Новые методы идентификации Listeria monocytogenes / Т. И. Карпова, С. А. Ермолаева, И. В. Лопырев [и др.] // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2001. – Т. 3, No 3. – С. 266–273.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

8
Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes: ГОСТ 32031­2012. – М.: Стандартинформ, 2014. – 47 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=8192
    Prefix
    Идентификация L. monocytogenes в соответствии с действующими нормативными документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента)
    Exact
    [4, 8]
    Suffix
    . Однако время исследований традиционными ме­ тодами варьирует от 3–4 дней при отрицательном результате, а для подтверждения положительного результата требуется до 7 дней [24]. Обнаружение L. monocytogenes в продуктах животного происхожде­ ния микробиологическим методом затруднено из­за высокой концентрации конкурентоспособной микро­ флоры, низкого уровня L. monocyto

9
Рекомендации по постановке ПЦР / Евроген. – Вер. 18 сен­ тября 2017 г. – URL: http://evrogen.ru/kit­user­manuals/Evrogen­PCR­ recommendation.pdf (дата обращения: 05.02.18).
Total in-text references: 2
  1. In-text reference with the coordinate start=11967
    Prefix
    Оптимизация ПЦР­РВ включает следующие этапы: определение точной тем­ пературы отжига праймеров и концентрацию ионов магния, при которых отмечается наивысшая интенсив­ ность ответного флуоресцентного сигнала, при высо­ кой специфичности. Оптимальная температура отжига определяется структурой праймеров и обычно варьи­ рует от 55 до 72 °C
    Exact
    [9]
    Suffix
    . Для расчета температуры отжига праймеров ис­ пользовали формулу Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C), где Tm – температура отжига, °C; А, Т, C, G – нуклеотидные основания [9]. В результате проведенных расчетов были получены температуры отжига 66 °С для прямого и 76 °С для об­ ратного праймеров.

  2. In-text reference with the coordinate start=12137
    Prefix
    Оптимальная температура отжига определяется структурой праймеров и обычно варьи­ рует от 55 до 72 °C [9]. Для расчета температуры отжига праймеров ис­ пользовали формулу Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C), где Tm – температура отжига, °C; А, Т, C, G – нуклеотидные основания
    Exact
    [9]
    Suffix
    . В результате проведенных расчетов были получены температуры отжига 66 °С для прямого и 76 °С для об­ ратного праймеров. Для пары праймеров, имеющих разную температуру отжига, при написании програм­ мы ПЦР выбирается наименьшая.

10
Тартаковский И. С., Малеев В. В., Ермолаева С. А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. – М.: Медицина для всех, 2002. – 200 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

11
A rapid differentiation of Listeria monocytogenes by use of PCR– SSCP in the listeriolysin O (hlyA) locus / A. Lehner, S. Loncarevic, M. Wagner [et al.] // J. Microbiol. Methods. – 1999. – Vol. 34, No. 3. – P. 165–171.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

12
Application of 5’­nuclease PCR for quantitative detection of Listeria monocytogenes in pure cultures, water, skim milk, and unpasteurized whole milk / H. K. Nogva, K. Rudi, K. Naterstad [et al.] // Appl. Environ. Microbi­ ol. – 2000. – Vol. 66, No. 10. – Р. 4266–4271; doi: 10.1128/AEM.66.10.4266­ 4271.2000.
Total in-text references: 2
  1. In-text reference with the coordinate start=9250
    Prefix
    В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния
    Exact
    [2, 12, 16, 26, 28]
    Suffix
    . При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

  2. In-text reference with the coordinate start=15403
    Prefix
    Результаты показали, что скрининговые исследова­ ния на основе оптимизированной ПЦР­РВ обеспечива­ ют быстрые и надежные результаты. клеток в образце, что согласуется с данными других исследователей
    Exact
    [12, 25]
    Suffix
    . Содержание в образце ДНК L. monocytogenes, соответствующее приблизительно 12 бактериальным клеткам, выявили только в одной ПЦР­РВ из трех проведенных (табл. 2). Определение специфичности.

13
Application of a multiplex polymerase chain reaction assay for the simultaneous confirmation of Listeria monocytogenes and other Listeria species in turkey sample surveillance / I. V. Wesley, K. M. Harmon, J. S. Dick­ son, A. R. Schwartz // J. Food Prot. – 2002. – Vol. 65, No. 5. – Р. 780–785.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9173
    Prefix
    Молекулярные методы, такие как ПЦР, позволяют быстро обнаружить и идентифицировать бактериаль­ ные патогены [27]. В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes
    Exact
    [13, 15, 19, 21]
    Suffix
    . А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

14
Comparative analysis of 16S and 23S rRNA sequences of Listeria species / B. Sallen, A. Rajoharison, S. Desvarenne [et al.] // Int. J. Syst. Bacte­ riol. – 1996. – Vol. 46, No. 3. – P. 669–674; doi: 10.1099/00207713­46­3­669.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

15
Detection and differentiation of Listeria spp. by a single reaction based on multiplex PCR / A. Bubert, I. Hein, M. Rauch [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. – 1999. – Vol. 65, No. 10. – P. 4688–4692.
Total in-text references: 4
  1. In-text reference with the coordinate start=7796
    Prefix
    L. monocytogenes обычно сосуществуют с другими видами этого рода, такими как непатогенная Listeria innocua, которая мо­ жет быть использована в качестве индикатора возмож­ ного присутствия L. monocytogenes в пищевых продук­ тах
    Exact
    [15]
    Suffix
    . Требования безопасности пищевых продуктов, принятые в большинстве стран, не допускают наличия L. monocytogenes [6, 18]. Идентификация L. monocytogenes в соответствии с действующими нормативными документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента)

  2. In-text reference with the coordinate start=9173
    Prefix
    Молекулярные методы, такие как ПЦР, позволяют быстро обнаружить и идентифицировать бактериаль­ ные патогены [27]. В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes
    Exact
    [13, 15, 19, 21]
    Suffix
    . А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

  3. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

  4. In-text reference with the coordinate start=11312
    Prefix
    Основанием для выбора явилось то, что этот белок у L. monocytogenes имеет две уникальные области последовательностей, отсутству­ ющие у других видов листерий, что делает его высоко­ специфичным и подходящим для точной качественной оценки всех штаммов L. monocytogenes [1]. Сравнивая iap­родственные гены разных видов листерий, A. Burbert и соавт.
    Exact
    [15]
    Suffix
    определили общие и переменные области в пределах этих генов, специ­ фичных для каждого из видов Listeria. Основываясь на этих последовательностях гена iap, были разрабо­ таны праймеры ПЦР для L. monocytogenes (табл. 1) [25].

16
Detection and quantification of the iap gene of Listeria monocytogenes and Listeria innocua by a new real­time quantitative PCR assay / I. Hein, D. Klein, A. Lehner [et al.] // Res. Microbiol. – 2001. – Vol. 152, No. 1. – Р. 37–46; https:// doi.org/10.1016/S0923­2508(00)01166­9.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9250
    Prefix
    В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния
    Exact
    [2, 12, 16, 26, 28]
    Suffix
    . При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

17
Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR / M. Doumith, C. Buchrieser, P. Glaser [et al.] // J. Clin. Mi­ crobiol. – 2004. – Vol. 42, No. 8. – P. 3819–3822; doi: 10.1128/JCM.42.8.3819­ 3822.2004.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

18
Gallagher D. L., Ebel E. D., Kause J. R. Draft FSIS Risk Assessment for Listeria in Ready­to­eat Meat and Poultry Products. – Washington, 2003. – URL: http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.198.7563 &rep=rep1&type=pdf (дата обращения: 05.02.18).
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=7913
    Prefix
    L. monocytogenes обычно сосуществуют с другими видами этого рода, такими как непатогенная Listeria innocua, которая мо­ жет быть использована в качестве индикатора возмож­ ного присутствия L. monocytogenes в пищевых продук­ тах [15]. Требования безопасности пищевых продуктов, принятые в большинстве стран, не допускают наличия L. monocytogenes
    Exact
    [6, 18]
    Suffix
    . Идентификация L. monocytogenes в соответствии с действующими нормативными документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента) [4, 8].

19
Lawrence L. M., Gilmour A. Incidence of Listeria spp. and Listeria monocytogenes in a poultry processing environment and in poultry pro­ ducts and their rapid confirmation by multiplex PCR // Appl. Environ. Mi­ crobiol. – 1994. – Vol. 60, No. 12. – Р. 4600–4604.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9173
    Prefix
    Молекулярные методы, такие как ПЦР, позволяют быстро обнаружить и идентифицировать бактериаль­ ные патогены [27]. В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes
    Exact
    [13, 15, 19, 21]
    Suffix
    . А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

20
Multilocus sequence typing of Listeria monocytogenes by use of hy­ pervariable genes reveals clonal and recombination histories of three line­ ages / R. Meinersmann, R. W. Phillips, M. Wiedmann, M. E. Berrang // Appl. Environ. Microbiol. – 2004. – Vol. 70, No. 4. – P. 2193–2203; doi: 10.1128/ AEM.70.4.2193­2203.2004.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

21
Multiplex PCR assay for the routine detection of Listeria in food / N. S. Bansal, F. H. McDonell, A. Smith [et al.] // Int. J. Food Microbiol. – 1996. – Vol. 33, No. 2–3. – Р. 293–300; https:// doi.org/10.1016/0168­1605(96)01161­0.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9173
    Prefix
    Молекулярные методы, такие как ПЦР, позволяют быстро обнаружить и идентифицировать бактериаль­ ные патогены [27]. В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes
    Exact
    [13, 15, 19, 21]
    Suffix
    . А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

22
Nightingale K., Windham K., Wiedmann M. Evolution and molecu­ lar phylogeny of Listeria monocytogenes isolated from human and animal listeriosis cases and foods // J. Bacteriol. – 2005. – Vol. 187, No. 16. – P. 5537– 5551; doi: 10.1128/JB.187.16.5537­5551.2005. Таблица 4 Определение L. monocytogenes в образцах пищевых продуктов микробиологическим методом и ПЦР-РВ No п/пНаименование образцаКоличество проб Количество положительных проб ПЦР-РВмикробиологический метод 1Говядина84 (50%)1 (12%) 2Свинина102 (20%)1 (10%) 3Полуфабрикаты мясные184 (22%)3 (17%) 4Птица103 (30%)2 (20%) 5Полуфабрикаты куриные73 (43%)1 (14%) 6Рыба и рыбные продукты1200 7Молоко пастеризованное600 8Масло сливочное2900 Всего10016 (16%)8 (8%) 13. Application of a multiplex polymerase chain reaction assay for the s
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.

23
Norton D. M. Polimerase chain reaction­based methods for detec­ tion of Listeria monocytogenes: Toward real­time screening for food and environmental samples. J. AOAC Int. 2002; 85 (2): 505–515.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=8651
    Prefix
    Обнаружение L. monocytogenes в продуктах животного происхожде­ ния микробиологическим методом затруднено из­за высокой концентрации конкурентоспособной микро­ флоры, низкого уровня L. monocytogenes и наличия ингибирующих листерию пищевых компонентов
    Exact
    [23]
    Suffix
    . Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР­РВ) представляет собой быструю и прак­ тичную альтернативу микробиологическому методу. Поэтому разработка видоспецифичных методов ПЦР для выявления генома L. monocytogenes является ак­ туальной задачей.

24
Paoli G. C., Bhunia A. K., Bayles D. O. Listeria monocytogenes // Food­ borne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology. Ed. P. M. Fratamico, A. K. Bhunia, J. L. Smith. Norfolk: Caister Academic, 2005: 295–325.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=8388
    Prefix
    документами осу­ ществляется традиционными микробиологическими (микроскопия, посев на питательные среды) и сероло­ гическими методами (реакция агглютинации, реакция связывания комплемента) [4, 8]. Однако время исследований традиционными ме­ тодами варьирует от 3–4 дней при отрицательном результате, а для подтверждения положительного результата требуется до 7 дней
    Exact
    [24]
    Suffix
    . Обнаружение L. monocytogenes в продуктах животного происхожде­ ния микробиологическим методом затруднено из­за высокой концентрации конкурентоспособной микро­ флоры, низкого уровня L. monocytogenes и наличия ингибирующих листерию пищевых компонентов [23].

25
Quantitative detection of Listeria monocytogenes and Listeria innocua by real­time PCR: Assessment of hly, iap, and lin02483 targets and AmpliFluor technology. D. Rodrígues­Lázaro, M. Hernández, M. Scortti [et al.]. Appl. Environ. Microbiol. 2004; 70 (3): 1366–1377; doi: 10.1128/ AEM.70.3.1366­1377.2004.
Total in-text references: 3
  1. In-text reference with the coordinate start=6339
    Prefix
    ДНК выделяли из образцов чистых культур с помощью на­ бора «СОРБ­ГМО­А» («Синтол», Москва) в соответствии с рекомендациями производителя. Олигонуклеотиды. Праймеры и зонды для идентифи­ кации бактерий L. monocytogenes, используемые в дан­ ной работе и описанные ранее в работе D. Rodrígues­ Lázaro и соавт.
    Exact
    [25]
    Suffix
    (GenBank AY174670 – AY174682), были синтезированы фирмой «Синтол». Первичная структура олигонуклеотидов представлена в таблице 1. Условия проведения ПЦР-РВ. Для постановки ПЦР использовали «Набор реагентов для проведения ПЦР­РВ» («Синтол», Россия).

  2. In-text reference with the coordinate start=11544
    Prefix
    Burbert и соавт. [15] определили общие и переменные области в пределах этих генов, специ­ фичных для каждого из видов Listeria. Основываясь на этих последовательностях гена iap, были разрабо­ таны праймеры ПЦР для L. monocytogenes (табл. 1)
    Exact
    [25]
    Suffix
    . Оптимизация ПЦР-РВ для специфического обнаружения бактерий L. monocytogenes. Оптимизация ПЦР­РВ включает следующие этапы: определение точной тем­ пературы отжига праймеров и концентрацию ионов магния, при которых отмечается наивысшая интенсив­ ность ответного флуоресцентного сигнала, при высо­ кой специфичности.

  3. In-text reference with the coordinate start=15403
    Prefix
    Результаты показали, что скрининговые исследова­ ния на основе оптимизированной ПЦР­РВ обеспечива­ ют быстрые и надежные результаты. клеток в образце, что согласуется с данными других исследователей
    Exact
    [12, 25]
    Suffix
    . Содержание в образце ДНК L. monocytogenes, соответствующее приблизительно 12 бактериальным клеткам, выявили только в одной ПЦР­РВ из трех проведенных (табл. 2). Определение специфичности.

26
Rapid enumeration of Listeria monocytogenes in artificially conta­ minated cabbage using real­time polymerase chain reaction. A. J. Hough, S. A. Harbison, M. G. Savill [et al.]. J. Food Prot. 2002; 65 (8): 1329–1332.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9250
    Prefix
    В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния
    Exact
    [2, 12, 16, 26, 28]
    Suffix
    . При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

27
Rijpens N. P., Herman L. M. Molecular methods for identification and detection of bacterial food pathogens. J. AOAC Int. 2002; 85 (4): 984–995.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9046
    Prefix
    Поэтому разработка видоспецифичных методов ПЦР для выявления генома L. monocytogenes является ак­ туальной задачей. Молекулярные методы, такие как ПЦР, позволяют быстро обнаружить и идентифицировать бактериаль­ ные патогены
    Exact
    [27]
    Suffix
    . В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28].

28
Rodrígues­Lázaro D., Hernández M., Pla M. Simultaneous quantita­ tive detection of Listeria spp. and Listeria monocytogenes using a duplex­ real­time PCR­based assay. FEMS Microbiol. Lett. 2004; 233 (2): 257–267; https:// doi.org/10.1111/j.1574­6968.2004.tb09490.x.
Total in-text references: 2
  1. In-text reference with the coordinate start=9250
    Prefix
    В литературе приведены результаты по применению нескольких традиционных ПЦР, по­ зволяющих выявлять L. monocytogenes [13, 15, 19, 21]. А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния
    Exact
    [2, 12, 16, 26, 28]
    Suffix
    . При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др. [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30].

  2. In-text reference with the coordinate start=13663
    Prefix
    Для оценки чувствительности реакции использовали выделенную ДНК, концентрация которой составила 4 нг/мкл. В соответствии со средним размером генома раз­ личных исследуемых микроорганизмов 1 нг геном­ ной ДНК соответствует как минимум 3 × 105 клеткам
    Exact
    [28]
    Suffix
    . Таким образом, концентрация ДНК 4 нг/мкл со­ ответствует приблизительно 12 × 105 бактериальным клеткам. Чувствительность ПЦР­РВ определяли путем по­ становки реакций 10­кратных разведений выделен­ ной ДНК, начиная с максимальной, равной 4 нг/мкл, и до 4 × 10­6 нг/мкл, что соответствует 1,2 бактериаль­ ной клетки в реакции.

29
The gene coding for protein p60 of Listeria monocytogenes and its use as a specific probe for Listeria monocytogenes. S. Köhler, M. Leimeister­ Wächter, T. Chakraborty [et al.]. Infect. Immun. 1990; 58 (6): 1943–1650.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=10949
    Prefix
    По результатам анализа литера­ турных данных для проведения ПЦР­РВ был выбран ген iap (GenBank, No Х52268), который кодирует по­ верхностный белок р60, известный также как гидро­ лаза клеточной стенки
    Exact
    [29]
    Suffix
    . Основанием для выбора явилось то, что этот белок у L. monocytogenes имеет две уникальные области последовательностей, отсутству­ ющие у других видов листерий, что делает его высоко­ специфичным и подходящим для точной качественной оценки всех штаммов L. monocytogenes [1].

30
σB­dependent gene induction and expression in Listeria monocytogenes during osmotic and acid stress conditions simulating the intesti­ nal environment. D. Sue, D. Fink, M. Wiedmann, K. J. Boor. Microbiology. 2004; 150 (Pt. 11): 3843–3855; doi: 10.1099/mic.0.27257­0. Поступила 09.02.18
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=9444
    Prefix
    А также описаны варианты ПЦР­РВ для ее обнаруже­ ния [2, 12, 16, 26, 28]. При идентификации L. monocytogenes в настоящее время в качестве мишеней для ПЦР используют различ­ ные гены: 16S и 23S рРНК, prs, gyrB, rpoB, hly, inlA и inlB, plcA, iap и др.
    Exact
    [3, 7, 10, 11, 14, 15, 17, 20, 22, 30]
    Suffix
    . Целью данного исследования была оптимиза­ ция качественной ПЦР­РВ для обнаружения генома L. monocytogenes при исследовании пищевых продук­ тов животного происхождения. Таблица 1 Структура праймеров и зонда [по D.