The 9 references with contexts in paper D. Bolshakov S., T. Nikeshina B., Д. Большаков С., Т. Никешина Б. (2018) “Спектрофотометрические и энзиматические методы биохимического анализа сыворотки крови сельскохозяйственных животных // Spectrophotometric and enzymatic methods for biochemical analysis of blood sera from farm animals” / spz:neicon:veterinary:y:2015:i:3:p:12-21

1
Васильева Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных. — 2-е изд., перераб. и доп. — М.: Россельхозиздат, 1982. — 254 с.
Total in-text references: 8
  1. In-text reference with the coordinate start=19116
    Prefix
    Связанный (прямой) билирубин реагирует быстро, несвязанный (непрямой) — после добавления акселераторных веществ, обладающих свойством ускорять реакцию между свободным билирубином и диазореактивом в водной среде путем повышения растворимости или каталитическим способом. В качестве акселераторов используются кофеин и бензоат натрия (метод Йендрашика–Клеггорна–Грофа)
    Exact
    [1, 7]
    Suffix
    , кофеин и мочевина, метиловый спирт, ацетамид и диметилсульфоксид (ДМСО). ПОКАЗАТЕЛИ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА Глюкоза — основной углевод, присутствующий в периферической крови. Окисление глюкозы — главный путь получения клетками энергии в организме.

  2. In-text reference with the coordinate start=20020
    Prefix
    Данный метод оказывает меньшее влияние на результаты анализа и не имеет недостатков ранее предложенных методов: β-D-глюкоза окисляется глюкозооксидазой с образованием D-глюконовой кислоты и пероксида водорода
    Exact
    [1]
    Suffix
    . В присутствии пероксидазы пероксид водорода, n-гидроксибензолсульфоновая кислота (n-ГБС), 4-аминоантипирин и фенол образуют хинониминовый красный краситель [8] (табл.). Концентрация образовавшегося в результате реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации глюкозы.

  3. In-text reference with the coordinate start=20495
    Prefix
    Концентрация образовавшегося в результате реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации глюкозы. К числу спектрофотометрических методов, получивших широкое распространение, можно отнести метод определения глюкозы по цветной реакции с о-толуидином (метод Гультмана)
    Exact
    [1, 6, 7]
    Suffix
    , состоящий в определении интенсивности окрашенного раствора при взаимодействии о-толуидина с глюкозой при нагревании в растворе уксусной кислоты. Молочная кислота (лактат) — продукт метаболизма, образующийся в результате молочной ферментации глюкозы и гликогена, который накапливается при физических упражнениях с высокой нагрузкой как результат повышения гликолитической активности.

  4. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  5. In-text reference with the coordinate start=29432
    Prefix
    Поглощение при 340 нм прямо пропорционально количеству неорганического фосфора, содержащегося в образце (таблица). Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой
    Exact
    [1, 7]
    Suffix
    . Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание.

  6. In-text reference with the coordinate start=35133
    Prefix
    Скорость увеличения поглощения излучения при 405 нм, обусловленная образованием n-нитрофенола в процессе гидролиза n-нитрофенилфосфата, пропорциональна активности фермента [8]. Более известен как метод Бессея–Лоури–Брока
    Exact
    [1, 3]
    Suffix
    . В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически [3, 6–7, 9].

  7. In-text reference with the coordinate start=36668
    Prefix
    Кинетический метод основан на том, что ЛДГ катализирует окисление L-лактата до пирувата в присутствии NAD, который одновременно восстанавливается до NADH (оптический тест Варбурга) [8]. Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности ЛДГ в сыворотке. Широкое распространение получил и динитрофенилгидразиновый метод
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанный на определении пирувата (пировиноградной кислоты) по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (метод Севела–Товарека). Креатинкиназа (КК) (АТФ: креатин-N-фосфо трансфе раза) — фермент, катализирующий обратимую реакцию фосфорилирования креатина.

  8. In-text reference with the coordinate start=38588
    Prefix
    Скорость образования ХНФ измеряется фотометрически, величина поглощения пропорциональна коцентрации амилазы в образце (таблица). Активность амилазы может быть оценена амилоклассическим методом и методом Каравея (со стойким крахмальным субстратом)
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанным на фотометрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза. Аспартатаминотрансфераза (АсАТ, АСТ) и аланинаминотрансфераза (АлАТ, АЛТ) катализируют обратимый перенос аминогрупп с L-аспарагиновой кислоты и L-аланина на α-кетоглутаровую кислоту.

2
Козинец Г.И. Интерпретация анализов крови и мочи и их клиническое значение. — М.: Триада-Х, 1998. — 104 с.
Total in-text references: 1
  1. In-text reference with the coordinate start=32961
    Prefix
    Хлориды. Для клинического анализа важно определять концентрацию хлоридов, так как они регулируют осмотическое давление внеклеточной жидкости и играют значительную роль в кислотно-щелочном балансе
    Exact
    [2]
    Suffix
    . В 1978 г. хлориды определяли по реакции преципитации в виде хлорида серебра после титрования избытка нитрата серебра тиоцианатным раствором. С этого времени было предложено много методов, включая ртутное титрование с использованием в качестве индикатора дифенилкарбазона [3, 6].

3
Колб В.Г., Камышников В.С. Клиническая биохимия (пособие для врачей-лаборантов). — Минск, Беларусь, 1976. — 310 с.
Total in-text references: 22
  1. In-text reference with the coordinate start=4783
    Prefix
    Впоследствии эта процедура была модифицирована Weichselbaum и соавт., Gornall и соавт. Принцип метода заключается в том, что белок сыворотки в щелочной среде при взаимодействии с ионами меди образует фиолетовый комплекс
    Exact
    [3, 5–8]
    Suffix
    (таблица). Абсорбция образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации белка в исследуемом образце. Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения.

  2. In-text reference with the coordinate start=6292
    Prefix
    Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    , и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3].

  3. In-text reference with the coordinate start=6556
    Prefix
    Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген [3, 5–7, 9], и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом
    Exact
    [3]
    Suffix
    . В 1965 г. Talke и Shubert ввели общую энзиматическую процедуру с использованием уреазы и глутаматдегидрогеназы [8]: мочевина гидролизуется уреазой, при этом образуется аммиак и углекислый газ.

  4. In-text reference with the coordinate start=7313
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические
    Exact
    [3, 6–8, 10]
    Suffix
    , энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  5. In-text reference with the coordinate start=8548
    Prefix
    Он основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовую кислоту 1 NAD (НАД) — никотинамидадениндинуклеотид (существует в двух формах: окисленной (NAD+) и восстановленной (NADH)). с образованием окрашенного соединения. Впоследствии метод подвергался многочисленным модификациям и до настоящего времени остается одним из наиболее распространенных
    Exact
    [3, 6, 7, 9]
    Suffix
    . Креатинин — конечный продукт креатин-фосфатной реакции: креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, из которого образуется креатинин (ангидрид креатина). Креатинин участвует в энергетическом обмене мышечной и других тканей.

  6. In-text reference with the coordinate start=18654
    Prefix
    Большинство химических методов определения общего содержания билирубина основаны на реакции между диазотированной сульфаниловой кислотой и билирубином, в результате которой образуется азобилирубин (реакция ван ден Берга
    Exact
    [3]
    Suffix
    ), имеющий максимум поглощения УФ-излучения при 560 нм (таблица). Связанный (прямой) билирубин реагирует быстро, несвязанный (непрямой) — после добавления акселераторных веществ, обладающих свойством ускорять реакцию между свободным билирубином и диазореактивом в водной среде путем повышения растворимости или каталитическим способом.

  7. In-text reference with the coordinate start=23156
    Prefix
    При использовании химических методов глицерин, освобожденный омылением триглицеридов, окисляют до формальдегида, концентрация последнего определяется спектрофотометрически с применением реакции Hantzch (метод Сардесая–Маннинга) [7], по цветной реакции с хромотроповой кислотой
    Exact
    [3]
    Suffix
    или ацетилацетоном [10]. Холестерин представляет собой вторичный одноатомный ароматический спирт, в молекуле которого имеется общее для всех стеринов полициклическое ядро циклопентанпергидрофенантрена.

  8. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  9. In-text reference with the coordinate start=25626
    Prefix
    По степени окраски вычисляют количество неорганического фосфора, содержащегося в ФЛ. Поскольку данный метод достаточно трудоемкий, требует проведения стадии экстракции липидов (как правило по методу Фолча
    Exact
    [3, 7]
    Suffix
    ), в рутинных лабораторных исследованиях используют энзиматический метод [8], основанный на гидролизе ФЛ фосфолипазой. Высвобождающийся холин затем окисляется холиноксидазой в бетаин с образованием перекиси водорода.

  10. In-text reference with the coordinate start=26976
    Prefix
    Соотношение кальция и красителя для образования комплекса: одна часть образца на 100 частей реагента. В качестве комплексона при определении кальция может быть использован глиоксаль-бис-[2-оксианил]
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    и о-крезолфталеин [6, 8, 9]. Магний — это второй по распространенности внутриклеточный катион в организме животных и человека после калия, он участвует в большом количестве ферментативных и метаболических процессов.

  11. In-text reference with the coordinate start=27644
    Prefix
    Впоследствии было разработано несколько методик его определения: комплексонометрическое титрование с ЭДТА, флюориметрическая процедура с использованием специфических хелатирующих агентов и спектрофотометрический метод, в основе которого лежит реакция титана желтого и гидроксида магния с образованием красного пигмента
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    . Все эти методы имели недостатки, которые отражались на точности результатов. Атомная абсорбция является методом, позволяющим наиболее точно определять концентрацию магния. Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала.

  12. In-text reference with the coordinate start=29402
    Prefix
    фосфора в сыворотке крови основано на взаимодействии молибдата аммония с фосфатами в кислой среде с образованием фосфорномолибденового комплекса, имеющего синюю окраску, без проведения депротеинизации [8]. Поглощение при 340 нм прямо пропорционально количеству неорганического фосфора, содержащегося в образце (таблица). Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном
    Exact
    [3]
    Suffix
    или аскорбиновой кислотой [1, 7]. Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание.

  13. In-text reference with the coordinate start=32363
    Prefix
    Ионы железа реагируют с окрашенным агентом (феррозин), что приводит к образованию яркоокрашенного комплекса [8]. Абсорбция измеряется фотометрически при длине волны 560 нм (таблица). В качестве альтернативного можно использовать метод определения железа по цветной реакции с β-фенантролином
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    : белки осаждают трихлоруксусной кислотой, которая при прогревании разрушает комплекс железа с трансферрином. Для установления оптимальной величины рН (4,8–5,0) добавляют ацетат аммония, а для восстановления всего железа — гидрозин.

  14. In-text reference with the coordinate start=33254
    Prefix
    В 1978 г. хлориды определяли по реакции преципитации в виде хлорида серебра после титрования избытка нитрата серебра тиоцианатным раствором. С этого времени было предложено много методов, включая ртутное титрование с использованием в качестве индикатора дифенилкарбазона
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    . Электрохимический метод был впервые представлен в 1950 г. Он основан на инкубации хлоридсодержащего раствора с электродами, выделяющими катион серебра в кислой среде. Время, необходимое для образования преципитатов в виде хлорида серебра, прямо пропорционально концентрации хлоридов в исследуемом растворе.

  15. In-text reference with the coordinate start=35133
    Prefix
    Скорость увеличения поглощения излучения при 405 нм, обусловленная образованием n-нитрофенола в процессе гидролиза n-нитрофенилфосфата, пропорциональна активности фермента [8]. Более известен как метод Бессея–Лоури–Брока
    Exact
    [1, 3]
    Suffix
    . В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически [3, 6–7, 9].

  16. In-text reference with the coordinate start=35384
    Prefix
    В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически
    Exact
    [3, 6–7, 9]
    Suffix
    . А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата [3, 6]. Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

  17. In-text reference with the coordinate start=35478
    Prefix
    Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически [3, 6–7, 9]. А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    . Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

  18. In-text reference with the coordinate start=36668
    Prefix
    Кинетический метод основан на том, что ЛДГ катализирует окисление L-лактата до пирувата в присутствии NAD, который одновременно восстанавливается до NADH (оптический тест Варбурга) [8]. Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности ЛДГ в сыворотке. Широкое распространение получил и динитрофенилгидразиновый метод
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанный на определении пирувата (пировиноградной кислоты) по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (метод Севела–Товарека). Креатинкиназа (КК) (АТФ: креатин-N-фосфо трансфе раза) — фермент, катализирующий обратимую реакцию фосфорилирования креатина.

  19. In-text reference with the coordinate start=38588
    Prefix
    Скорость образования ХНФ измеряется фотометрически, величина поглощения пропорциональна коцентрации амилазы в образце (таблица). Активность амилазы может быть оценена амилоклассическим методом и методом Каравея (со стойким крахмальным субстратом)
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанным на фотометрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза. Аспартатаминотрансфераза (АсАТ, АСТ) и аланинаминотрансфераза (АлАТ, АЛТ) катализируют обратимый перенос аминогрупп с L-аспарагиновой кислоты и L-аланина на α-кетоглутаровую кислоту.

  20. In-text reference with the coordinate start=40557
    Prefix
    Возможно определение активности аминотрансфераз по методу Райтмана–Френкеля (1957), который основан на получении окрашенных динитрофенилгидразонов щавелевоуксусной (оксалоацетата) и пировиноградной (пирувата) кислот
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Холинэстераза. Различают два типа холинэстераз — ацетилхолинэстеразу, или истинную холинэстеразу (АХЭ, ацетилхолин-ацетилгидролаза), и псевдохолинэстеразу (ХЭ, ацилхолин-ацилгидролаза). Истинная холинэстераза содержится преимущественно в эритроцитах, нервной и мышечной тканях; псевдохолинэстераза — в сыворотке крови, печени, поджелудочной железе.

  21. In-text reference with the coordinate start=41477
    Prefix
    Псевдохолинэстераза не отличается строгой субстратной специфичностью и гидролизует такие субстраты, как ацетилхолин, бензоилхолин, сукцинилхолин и другие эфиры холина. Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7].

  22. In-text reference with the coordinate start=41599
    Prefix
    Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина [3, 6, 7]. Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    , фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7]. В этом случае холинэстераза гидролизует субстрат с образованием масляной кислоты (бутирата) и тиохолина.

5
Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические: справочник / сост. Б.И. Антонов, Т.Ф. Яковлева, В.И. Дерябина [и др.]; под ред. Б.И. Антонова. — М.: Агропромиздат, 1991. — 287 с.
Total in-text references: 7
  1. In-text reference with the coordinate start=4783
    Prefix
    Впоследствии эта процедура была модифицирована Weichselbaum и соавт., Gornall и соавт. Принцип метода заключается в том, что белок сыворотки в щелочной среде при взаимодействии с ионами меди образует фиолетовый комплекс
    Exact
    [3, 5–8]
    Suffix
    (таблица). Абсорбция образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации белка в исследуемом образце. Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения.

  2. In-text reference with the coordinate start=6292
    Prefix
    Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    , и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3].

  3. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  4. In-text reference with the coordinate start=27644
    Prefix
    Впоследствии было разработано несколько методик его определения: комплексонометрическое титрование с ЭДТА, флюориметрическая процедура с использованием специфических хелатирующих агентов и спектрофотометрический метод, в основе которого лежит реакция титана желтого и гидроксида магния с образованием красного пигмента
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    . Все эти методы имели недостатки, которые отражались на точности результатов. Атомная абсорбция является методом, позволяющим наиболее точно определять концентрацию магния. Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала.

  5. In-text reference with the coordinate start=29597
    Prefix
    Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой [1, 7]. Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой)
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии [5–7, 9], который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени.

  6. In-text reference with the coordinate start=29848
    Prefix
    Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени. Натрий окрашивает пламя в ярко-желтый цвет, а калий — в слабый красно-фиолетовый.

  7. In-text reference with the coordinate start=34518
    Prefix
    фосфатаза (ЩФ) (фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кислоты, фосфомоноэстераза 1) — фермент гидролаза, отщепляющий фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов. Фермент проявляет наибольшую активность в щелочной среде (рН от 8,6 до 10,1). Концентрация ЩФ определяется по изменению скорости гидролиза различных фосфатных эфиров
    Exact
    [5–9]
    Suffix
    . n-Нитрофенилфосфат — один из таких эфиров, использовался как субстрат Fujita в 1939 г. Bowers и McComb в дальнейшем модифицировали процедуру кинетического анализа. В 1974 г. Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного.

6
Лабораторные методы исследования в клинике: справочник / В.В. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, Р.П. Золотницкая [и др.]; под ред. В.В. Меньшикова. — М.: Медицина, 1987. — 368 с.
Total in-text references: 32
  1. In-text reference with the coordinate start=4250
    Prefix
    Простые белки состоят только из аминокислот, в сложные входят и другие вещества: в липопротеиды — липиды, в гликопротеиды — углеводы, в нуклеопротеиды — нуклеиновые основания. Колориметрическая реакция между молекулами белка и ионами меди, так называемая биуретовая реакция, известна с 1848 г.
    Exact
    [6]
    Suffix
    . В 1914 г. была опубликована работа Regler и соавт., и с этого времени основное внимание было уделено стабилизации ионов меди в щелочном реагенте. В 1939 г. Kingsley и соавт. модифицировали процедуру, а в 1942 г. предложили использовать в качестве комплексона тартрат натрия или калия.

  2. In-text reference with the coordinate start=4783
    Prefix
    Впоследствии эта процедура была модифицирована Weichselbaum и соавт., Gornall и соавт. Принцип метода заключается в том, что белок сыворотки в щелочной среде при взаимодействии с ионами меди образует фиолетовый комплекс
    Exact
    [3, 5–8]
    Suffix
    (таблица). Абсорбция образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации белка в исследуемом образце. Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения.

  3. In-text reference with the coordinate start=5299
    Prefix
    Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения. Для определения сывороточного альбумина методы фракционного высаливания были слишком трудоемки и заменены методами с применением азокрасителей. Использование реакции с бромкрезоловым зеленым
    Exact
    [6–8, 10]
    Suffix
    стало предпочтительным методом из-за высокой специфичности к альбумину и незначительному влиянию на данную реакцию гемолиза, билирубина и салицилатов. Суть метода заключается в избирательном взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым при рН 4,2 (таблица).

  4. In-text reference with the coordinate start=5871
    Prefix
    Увеличение поглощения образующегося комплекса альбумин—краситель при 630 нм прямо пропорционально концентрации альбумина. Менее специфичными являются методы определения альбумина с бромкрезоловым красным, метиловым оранжевым и натриевой солью 2-(4-оксиазобензол)бензойной кислоты
    Exact
    [6]
    Suffix
    . ПОКАЗАТЕЛИ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА Мочевина — осмотически активное вещество, играющее важную роль в механизмах концентрирования мочи. Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.

  5. In-text reference with the coordinate start=6292
    Prefix
    Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    , и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3].

  6. In-text reference with the coordinate start=6992
    Prefix
    Выделенный аммиак в присутствии NADH1 взаимодействует с α-кетоглутаратом с образованием глутамата. В результате реакции NADH подвергается окислению, что сопровождается уменьшением абсорбции (оптический тест Варбурга
    Exact
    [6]
    Suffix
    ), интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации мочевины в исследуемом образце (табл.). Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками.

  7. In-text reference with the coordinate start=7313
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические
    Exact
    [3, 6–8, 10]
    Suffix
    , энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  8. In-text reference with the coordinate start=8548
    Prefix
    Он основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовую кислоту 1 NAD (НАД) — никотинамидадениндинуклеотид (существует в двух формах: окисленной (NAD+) и восстановленной (NADH)). с образованием окрашенного соединения. Впоследствии метод подвергался многочисленным модификациям и до настоящего времени остается одним из наиболее распространенных
    Exact
    [3, 6, 7, 9]
    Suffix
    . Креатинин — конечный продукт креатин-фосфатной реакции: креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, из которого образуется креатинин (ангидрид креатина). Креатинин участвует в энергетическом обмене мышечной и других тканей.

  9. In-text reference with the coordinate start=15125
    Prefix
    Концентрация хлоридов в сыворотке стабильна в течение одного дня при комнатной температуре (18–25 °С) и три месяца в холодильнике при –20 °С Таблица Принципы спектрофотометрического и энзиматического определения основных биохимических показателей сыворотки (плазмы) крови сельскохозяйственных животных (Продолжение) кратом натрия в щелочной среде (цветная реакция Яффе, метод Поппера)
    Exact
    [6, 8]
    Suffix
    с образованием окрашенного комплекса, поглощающего излучение при 510 нм (таблица). Скорость образования окраски пропорциональна концентрации креатинина в образце. ПОКАЗАТЕЛИ ПИГМЕНТНОГО ОБМЕНА Билирубин — желто-красный пигмент; представляет собой линейный тетрапиррол.

  10. In-text reference with the coordinate start=20495
    Prefix
    Концентрация образовавшегося в результате реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации глюкозы. К числу спектрофотометрических методов, получивших широкое распространение, можно отнести метод определения глюкозы по цветной реакции с о-толуидином (метод Гультмана)
    Exact
    [1, 6, 7]
    Suffix
    , состоящий в определении интенсивности окрашенного раствора при взаимодействии о-толуидина с глюкозой при нагревании в растворе уксусной кислоты. Молочная кислота (лактат) — продукт метаболизма, образующийся в результате молочной ферментации глюкозы и гликогена, который накапливается при физических упражнениях с высокой нагрузкой как результат повышения гликолитической активности.

  11. In-text reference with the coordinate start=21385
    Prefix
    Принцип определения основан на способности молочной кислоты в присутствии серной, фосфорной кислот и солей меди образовывать уксусный альдегид, который, реагируя с параоксидифенилом (С6Н5С6Н4ОН), и дает фиолетово окрашенные продукты
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . Фотометрирование проводят при длине волны 565 нм. Реакция очень чувствительна, поэтому надо строго выдерживать все условия выполнения исследования. В настоящее время все чаще применяют ферментные методы определения молочной кислоты, основанные на измерении скорости окисления лактата лактатоксидазой (реже лактатдегидрогеназой) до пирувата и перекиси водорода.

  12. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  13. In-text reference with the coordinate start=26976
    Prefix
    Соотношение кальция и красителя для образования комплекса: одна часть образца на 100 частей реагента. В качестве комплексона при определении кальция может быть использован глиоксаль-бис-[2-оксианил]
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    и о-крезолфталеин [6, 8, 9]. Магний — это второй по распространенности внутриклеточный катион в организме животных и человека после калия, он участвует в большом количестве ферментативных и метаболических процессов.

  14. In-text reference with the coordinate start=27001
    Prefix
    Соотношение кальция и красителя для образования комплекса: одна часть образца на 100 частей реагента. В качестве комплексона при определении кальция может быть использован глиоксаль-бис-[2-оксианил] [3, 6] и о-крезолфталеин
    Exact
    [6, 8, 9]
    Suffix
    . Магний — это второй по распространенности внутриклеточный катион в организме животных и человека после калия, он участвует в большом количестве ферментативных и метаболических процессов. Метод определения концентрации магния впервые был предложен Kramer, Tisdall, Briggs и соавт. в 20-х гг.

  15. In-text reference with the coordinate start=27644
    Prefix
    Впоследствии было разработано несколько методик его определения: комплексонометрическое титрование с ЭДТА, флюориметрическая процедура с использованием специфических хелатирующих агентов и спектрофотометрический метод, в основе которого лежит реакция титана желтого и гидроксида магния с образованием красного пигмента
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    . Все эти методы имели недостатки, которые отражались на точности результатов. Атомная абсорбция является методом, позволяющим наиболее точно определять концентрацию магния. Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала.

  16. In-text reference with the coordinate start=28157
    Prefix
    Совсем недавно был предложен спектрофотометрический метод, который стал наиболее популярным. В качестве окрашивающих агентов используют кальмагит, ксилидиловый голубой [8], эриохромовый черный Т, магон
    Exact
    [6]
    Suffix
    или метилтимоловый голубой. При использовании металлохромного индикатора кальмагита нет необходимости проводить депротеинизацию, и результаты анализа имеют высокую сходимость с данными атомной абсорбции: ионы магния реагируют с кальмагитом в щелочной среде, при этом формируется комплекс, имеющий красное окрашивание (табл.

  17. In-text reference with the coordinate start=29597
    Prefix
    Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой [1, 7]. Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой)
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии [5–7, 9], который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени.

  18. In-text reference with the coordinate start=29848
    Prefix
    Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени. Натрий окрашивает пламя в ярко-желтый цвет, а калий — в слабый красно-фиолетовый.

  19. In-text reference with the coordinate start=32363
    Prefix
    Ионы железа реагируют с окрашенным агентом (феррозин), что приводит к образованию яркоокрашенного комплекса [8]. Абсорбция измеряется фотометрически при длине волны 560 нм (таблица). В качестве альтернативного можно использовать метод определения железа по цветной реакции с β-фенантролином
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    : белки осаждают трихлоруксусной кислотой, которая при прогревании разрушает комплекс железа с трансферрином. Для установления оптимальной величины рН (4,8–5,0) добавляют ацетат аммония, а для восстановления всего железа — гидрозин.

  20. In-text reference with the coordinate start=33254
    Prefix
    В 1978 г. хлориды определяли по реакции преципитации в виде хлорида серебра после титрования избытка нитрата серебра тиоцианатным раствором. С этого времени было предложено много методов, включая ртутное титрование с использованием в качестве индикатора дифенилкарбазона
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    . Электрохимический метод был впервые представлен в 1950 г. Он основан на инкубации хлоридсодержащего раствора с электродами, выделяющими катион серебра в кислой среде. Время, необходимое для образования преципитатов в виде хлорида серебра, прямо пропорционально концентрации хлоридов в исследуемом растворе.

  21. In-text reference with the coordinate start=34518
    Prefix
    фосфатаза (ЩФ) (фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кислоты, фосфомоноэстераза 1) — фермент гидролаза, отщепляющий фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов. Фермент проявляет наибольшую активность в щелочной среде (рН от 8,6 до 10,1). Концентрация ЩФ определяется по изменению скорости гидролиза различных фосфатных эфиров
    Exact
    [5–9]
    Suffix
    . n-Нитрофенилфосфат — один из таких эфиров, использовался как субстрат Fujita в 1939 г. Bowers и McComb в дальнейшем модифицировали процедуру кинетического анализа. В 1974 г. Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного.

  22. In-text reference with the coordinate start=35384
    Prefix
    В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически
    Exact
    [3, 6–7, 9]
    Suffix
    . А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата [3, 6]. Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

  23. In-text reference with the coordinate start=35478
    Prefix
    Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически [3, 6–7, 9]. А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    . Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

  24. In-text reference with the coordinate start=36668
    Prefix
    Кинетический метод основан на том, что ЛДГ катализирует окисление L-лактата до пирувата в присутствии NAD, который одновременно восстанавливается до NADH (оптический тест Варбурга) [8]. Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности ЛДГ в сыворотке. Широкое распространение получил и динитрофенилгидразиновый метод
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанный на определении пирувата (пировиноградной кислоты) по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (метод Севела–Товарека). Креатинкиназа (КК) (АТФ: креатин-N-фосфо трансфе раза) — фермент, катализирующий обратимую реакцию фосфорилирования креатина.

  25. In-text reference with the coordinate start=38588
    Prefix
    Скорость образования ХНФ измеряется фотометрически, величина поглощения пропорциональна коцентрации амилазы в образце (таблица). Активность амилазы может быть оценена амилоклассическим методом и методом Каравея (со стойким крахмальным субстратом)
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанным на фотометрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза. Аспартатаминотрансфераза (АсАТ, АСТ) и аланинаминотрансфераза (АлАТ, АЛТ) катализируют обратимый перенос аминогрупп с L-аспарагиновой кислоты и L-аланина на α-кетоглутаровую кислоту.

  26. In-text reference with the coordinate start=39426
    Prefix
    Принцип метода основан на каталитической реакции переноса аминогруппы с L-аланина на α-кетоглутарат с образованием пирувата и L-глутамата под действием АлАТ. ЛДГ подвергается окислению, при этом NADН окисляется до NAD. Уровень снижения абсорбции прямо пропорционален активности АлАТ
    Exact
    [6, 8, 10]
    Suffix
    . Первые кинетические измерения активности АсАТ в диагностических целях были описаны Karmen и соавт. В 1955 г. они проводились с использованием сопряженной реакции в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ) и NADH.

  27. In-text reference with the coordinate start=40557
    Prefix
    Возможно определение активности аминотрансфераз по методу Райтмана–Френкеля (1957), который основан на получении окрашенных динитрофенилгидразонов щавелевоуксусной (оксалоацетата) и пировиноградной (пирувата) кислот
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Холинэстераза. Различают два типа холинэстераз — ацетилхолинэстеразу, или истинную холинэстеразу (АХЭ, ацетилхолин-ацетилгидролаза), и псевдохолинэстеразу (ХЭ, ацилхолин-ацилгидролаза). Истинная холинэстераза содержится преимущественно в эритроцитах, нервной и мышечной тканях; псевдохолинэстераза — в сыворотке крови, печени, поджелудочной железе.

  28. In-text reference with the coordinate start=41477
    Prefix
    Псевдохолинэстераза не отличается строгой субстратной специфичностью и гидролизует такие субстраты, как ацетилхолин, бензоилхолин, сукцинилхолин и другие эфиры холина. Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7].

  29. In-text reference with the coordinate start=41599
    Prefix
    Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина [3, 6, 7]. Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного
    Exact
    [3, 6]
    Suffix
    , фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7]. В этом случае холинэстераза гидролизует субстрат с образованием масляной кислоты (бутирата) и тиохолина.

  30. In-text reference with the coordinate start=41782
    Prefix
    Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . В этом случае холинэстераза гидролизует субстрат с образованием масляной кислоты (бутирата) и тиохолина. Тиохолин взаимодействует с 5,5’-дитио-бис-(2-нитро-бензойной кислотой) с образованием 2-нитро-5-меркаптобензоата, окрашенного в желтый цвет.

  31. In-text reference with the coordinate start=42820
    Prefix
    Принцип кинетического спектрофотометрического метода определения активности основан на том, что ГГТ катализирует реакцию переноса L-γ-глутамилового остатка с L-γ-глутамил-n-нитроанилида на глицилглицин (метод Орловского и др.). Количество освобожденного в ходе реакции n-нитроанилина измеряется и служит мерой активности ГГТ
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . В качестве субстрата могут быть использованы L-γ-глутамиланилид (метод Гольдберга и др.) и производное L-γ-глутамил-n-нитроанилида — L-γглутамил-3-карбокси-4-нитро анилид. В качестве буферов могут применяться трис-буфер, глицилглициновый, 2-амино-2-метил-1,3-пропандиоловый.

  32. In-text reference with the coordinate start=43307
    Prefix
    Вид буфера почти не оказывает влияния на активность фермента. Преимущество глицилглицинового буфера состоит в том, что он одновременно является и буфером, и акцептором γ-глутамилового остатка
    Exact
    [6]
    Suffix
    . ПОКАЗАТЕЛИ ОБЩЕГО КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ Гемоглобин (ГГ). Из различных методов определения уровня ГГ в крови наиболее широко используется 2 АМФ — аденозинмонофосфат (англ. AMP); 3 АДФ — аденозиндифосфат (англ.

7
Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник / под ред. И.П. Кондрахина. — М.: КолосС, 2004. — 520 с.
Total in-text references: 27
  1. In-text reference with the coordinate start=4783
    Prefix
    Впоследствии эта процедура была модифицирована Weichselbaum и соавт., Gornall и соавт. Принцип метода заключается в том, что белок сыворотки в щелочной среде при взаимодействии с ионами меди образует фиолетовый комплекс
    Exact
    [3, 5–8]
    Suffix
    (таблица). Абсорбция образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации белка в исследуемом образце. Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения.

  2. In-text reference with the coordinate start=5299
    Prefix
    Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения. Для определения сывороточного альбумина методы фракционного высаливания были слишком трудоемки и заменены методами с применением азокрасителей. Использование реакции с бромкрезоловым зеленым
    Exact
    [6–8, 10]
    Suffix
    стало предпочтительным методом из-за высокой специфичности к альбумину и незначительному влиянию на данную реакцию гемолиза, билирубина и салицилатов. Суть метода заключается в избирательном взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым при рН 4,2 (таблица).

  3. In-text reference with the coordinate start=6292
    Prefix
    Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    , и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3].

  4. In-text reference with the coordinate start=7313
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические
    Exact
    [3, 6–8, 10]
    Suffix
    , энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  5. In-text reference with the coordinate start=8548
    Prefix
    Он основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовую кислоту 1 NAD (НАД) — никотинамидадениндинуклеотид (существует в двух формах: окисленной (NAD+) и восстановленной (NADH)). с образованием окрашенного соединения. Впоследствии метод подвергался многочисленным модификациям и до настоящего времени остается одним из наиболее распространенных
    Exact
    [3, 6, 7, 9]
    Suffix
    . Креатинин — конечный продукт креатин-фосфатной реакции: креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, из которого образуется креатинин (ангидрид креатина). Креатинин участвует в энергетическом обмене мышечной и других тканей.

  6. In-text reference with the coordinate start=19116
    Prefix
    Связанный (прямой) билирубин реагирует быстро, несвязанный (непрямой) — после добавления акселераторных веществ, обладающих свойством ускорять реакцию между свободным билирубином и диазореактивом в водной среде путем повышения растворимости или каталитическим способом. В качестве акселераторов используются кофеин и бензоат натрия (метод Йендрашика–Клеггорна–Грофа)
    Exact
    [1, 7]
    Suffix
    , кофеин и мочевина, метиловый спирт, ацетамид и диметилсульфоксид (ДМСО). ПОКАЗАТЕЛИ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА Глюкоза — основной углевод, присутствующий в периферической крови. Окисление глюкозы — главный путь получения клетками энергии в организме.

  7. In-text reference with the coordinate start=20495
    Prefix
    Концентрация образовавшегося в результате реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации глюкозы. К числу спектрофотометрических методов, получивших широкое распространение, можно отнести метод определения глюкозы по цветной реакции с о-толуидином (метод Гультмана)
    Exact
    [1, 6, 7]
    Suffix
    , состоящий в определении интенсивности окрашенного раствора при взаимодействии о-толуидина с глюкозой при нагревании в растворе уксусной кислоты. Молочная кислота (лактат) — продукт метаболизма, образующийся в результате молочной ферментации глюкозы и гликогена, который накапливается при физических упражнениях с высокой нагрузкой как результат повышения гликолитической активности.

  8. In-text reference with the coordinate start=21385
    Prefix
    Принцип определения основан на способности молочной кислоты в присутствии серной, фосфорной кислот и солей меди образовывать уксусный альдегид, который, реагируя с параоксидифенилом (С6Н5С6Н4ОН), и дает фиолетово окрашенные продукты
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . Фотометрирование проводят при длине волны 565 нм. Реакция очень чувствительна, поэтому надо строго выдерживать все условия выполнения исследования. В настоящее время все чаще применяют ферментные методы определения молочной кислоты, основанные на измерении скорости окисления лактата лактатоксидазой (реже лактатдегидрогеназой) до пирувата и перекиси водорода.

  9. In-text reference with the coordinate start=23106
    Prefix
    При использовании химических методов глицерин, освобожденный омылением триглицеридов, окисляют до формальдегида, концентрация последнего определяется спектрофотометрически с применением реакции Hantzch (метод Сардесая–Маннинга)
    Exact
    [7]
    Suffix
    , по цветной реакции с хромотроповой кислотой [3] или ацетилацетоном [10]. Холестерин представляет собой вторичный одноатомный ароматический спирт, в молекуле которого имеется общее для всех стеринов полициклическое ядро циклопентанпергидрофенантрена.

  10. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  11. In-text reference with the coordinate start=25148
    Prefix
    По природе спирта ФЛ можно разделить на фосфоглицериды, фосфосфингозины и фосфоинозитиды. Об общей концентрации ФЛ обычно судят по содержанию в них липидного фосфора, на долю которого приходится 4% молекулярного веса ФЛ (справедливо для фосфотидилхолинов (лецитинов)
    Exact
    [7]
    Suffix
    ). Так, метод Бартлетта–Ушера основан на минерализации липидов с помощью хлорной кислоты. Неорганический фосфор, взаимодействуя с молибдатом аммония, образует фосфомолибденовую кислоту, которую восстанавливают эйконогеном и пиросульфитом натрия в молибденовую синь.

  12. In-text reference with the coordinate start=25626
    Prefix
    По степени окраски вычисляют количество неорганического фосфора, содержащегося в ФЛ. Поскольку данный метод достаточно трудоемкий, требует проведения стадии экстракции липидов (как правило по методу Фолча
    Exact
    [3, 7]
    Suffix
    ), в рутинных лабораторных исследованиях используют энзиматический метод [8], основанный на гидролизе ФЛ фосфолипазой. Высвобождающийся холин затем окисляется холиноксидазой в бетаин с образованием перекиси водорода.

  13. In-text reference with the coordinate start=26350
    Prefix
    ПОКАЗАТЕЛИ МИНЕРАЛЬНОГО ОБМЕНА Кальций — это наиболее распространенный и один из наиболее важных элементов в организме человека и животных. Примерно 99% всего кальция находится в костях. Определение кальция в сыворотке крови основано на образовании окрашенного комплекса с Арсеназо III
    Exact
    [7]
    Suffix
    , интенсивность окраски раствора которого прямо пропорциональна концентрации кальция в образце. Арсеназо III — металлокомплексон из группы диазокомплексообразователей, которые имеют неодинаковое сродство к различным ионам металлов.

  14. In-text reference with the coordinate start=27644
    Prefix
    Впоследствии было разработано несколько методик его определения: комплексонометрическое титрование с ЭДТА, флюориметрическая процедура с использованием специфических хелатирующих агентов и спектрофотометрический метод, в основе которого лежит реакция титана желтого и гидроксида магния с образованием красного пигмента
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    . Все эти методы имели недостатки, которые отражались на точности результатов. Атомная абсорбция является методом, позволяющим наиболее точно определять концентрацию магния. Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала.

  15. In-text reference with the coordinate start=29432
    Prefix
    Поглощение при 340 нм прямо пропорционально количеству неорганического фосфора, содержащегося в образце (таблица). Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой
    Exact
    [1, 7]
    Suffix
    . Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание.

  16. In-text reference with the coordinate start=29597
    Prefix
    Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой [1, 7]. Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой)
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии [5–7, 9], который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени.

  17. In-text reference with the coordinate start=29848
    Prefix
    Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени. Натрий окрашивает пламя в ярко-желтый цвет, а калий — в слабый красно-фиолетовый.

  18. In-text reference with the coordinate start=32363
    Prefix
    Ионы железа реагируют с окрашенным агентом (феррозин), что приводит к образованию яркоокрашенного комплекса [8]. Абсорбция измеряется фотометрически при длине волны 560 нм (таблица). В качестве альтернативного можно использовать метод определения железа по цветной реакции с β-фенантролином
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    : белки осаждают трихлоруксусной кислотой, которая при прогревании разрушает комплекс железа с трансферрином. Для установления оптимальной величины рН (4,8–5,0) добавляют ацетат аммония, а для восстановления всего железа — гидрозин.

  19. In-text reference with the coordinate start=34518
    Prefix
    фосфатаза (ЩФ) (фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кислоты, фосфомоноэстераза 1) — фермент гидролаза, отщепляющий фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов. Фермент проявляет наибольшую активность в щелочной среде (рН от 8,6 до 10,1). Концентрация ЩФ определяется по изменению скорости гидролиза различных фосфатных эфиров
    Exact
    [5–9]
    Suffix
    . n-Нитрофенилфосфат — один из таких эфиров, использовался как субстрат Fujita в 1939 г. Bowers и McComb в дальнейшем модифицировали процедуру кинетического анализа. В 1974 г. Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного.

  20. In-text reference with the coordinate start=35384
    Prefix
    В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически
    Exact
    [3, 6–7, 9]
    Suffix
    . А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата [3, 6]. Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

  21. In-text reference with the coordinate start=36668
    Prefix
    Кинетический метод основан на том, что ЛДГ катализирует окисление L-лактата до пирувата в присутствии NAD, который одновременно восстанавливается до NADH (оптический тест Варбурга) [8]. Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности ЛДГ в сыворотке. Широкое распространение получил и динитрофенилгидразиновый метод
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанный на определении пирувата (пировиноградной кислоты) по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (метод Севела–Товарека). Креатинкиназа (КК) (АТФ: креатин-N-фосфо трансфе раза) — фермент, катализирующий обратимую реакцию фосфорилирования креатина.

  22. In-text reference with the coordinate start=38588
    Prefix
    Скорость образования ХНФ измеряется фотометрически, величина поглощения пропорциональна коцентрации амилазы в образце (таблица). Активность амилазы может быть оценена амилоклассическим методом и методом Каравея (со стойким крахмальным субстратом)
    Exact
    [1, 3, 6, 7]
    Suffix
    , основанным на фотометрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза. Аспартатаминотрансфераза (АсАТ, АСТ) и аланинаминотрансфераза (АлАТ, АЛТ) катализируют обратимый перенос аминогрупп с L-аспарагиновой кислоты и L-аланина на α-кетоглутаровую кислоту.

  23. In-text reference with the coordinate start=40557
    Prefix
    Возможно определение активности аминотрансфераз по методу Райтмана–Френкеля (1957), который основан на получении окрашенных динитрофенилгидразонов щавелевоуксусной (оксалоацетата) и пировиноградной (пирувата) кислот
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Холинэстераза. Различают два типа холинэстераз — ацетилхолинэстеразу, или истинную холинэстеразу (АХЭ, ацетилхолин-ацетилгидролаза), и псевдохолинэстеразу (ХЭ, ацилхолин-ацилгидролаза). Истинная холинэстераза содержится преимущественно в эритроцитах, нервной и мышечной тканях; псевдохолинэстераза — в сыворотке крови, печени, поджелудочной железе.

  24. In-text reference with the coordinate start=41477
    Prefix
    Псевдохолинэстераза не отличается строгой субстратной специфичностью и гидролизует такие субстраты, как ацетилхолин, бензоилхолин, сукцинилхолин и другие эфиры холина. Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина
    Exact
    [3, 6, 7]
    Suffix
    . Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7].

  25. In-text reference with the coordinate start=41627
    Prefix
    Принцип определения активности холинэстеразы в сыворотке крови основан на гидролизе ацетилхолинхлорида под действием фермента с образованием уксусной кислоты и холина [3, 6, 7]. Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего
    Exact
    [7]
    Suffix
    ) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом [6, 7]. В этом случае холинэстераза гидролизует субстрат с образованием масляной кислоты (бутирата) и тиохолина.

  26. In-text reference with the coordinate start=41782
    Prefix
    Уксусная кислота сдвигает рН буферного раствора, что устанавливается с помощью индикатора (фенолового красного [3, 6], фиолетового синего [7]) по изменению цвета буферного раствора. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови возможно методом с субстратом бутирилтиохолина йодидом
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . В этом случае холинэстераза гидролизует субстрат с образованием масляной кислоты (бутирата) и тиохолина. Тиохолин взаимодействует с 5,5’-дитио-бис-(2-нитро-бензойной кислотой) с образованием 2-нитро-5-меркаптобензоата, окрашенного в желтый цвет.

  27. In-text reference with the coordinate start=42820
    Prefix
    Принцип кинетического спектрофотометрического метода определения активности основан на том, что ГГТ катализирует реакцию переноса L-γ-глутамилового остатка с L-γ-глутамил-n-нитроанилида на глицилглицин (метод Орловского и др.). Количество освобожденного в ходе реакции n-нитроанилина измеряется и служит мерой активности ГГТ
    Exact
    [6, 7]
    Suffix
    . В качестве субстрата могут быть использованы L-γ-глутамиланилид (метод Гольдберга и др.) и производное L-γ-глутамил-n-нитроанилида — L-γглутамил-3-карбокси-4-нитро анилид. В качестве буферов могут применяться трис-буфер, глицилглициновый, 2-амино-2-метил-1,3-пропандиоловый.

8
Методические указания по биохимическому исследованию крови животных с использованием диагностических наборов: утв. ГУВ МСХиП РБ 27.11.2007 г. / И.Н. Дубина, А.П. Курдеко, И.В. Фомченко, И.И. Смильгин. — Витебск: УО ВГАВМ, 2008. — 60 с.
Total in-text references: 25
  1. In-text reference with the coordinate start=4783
    Prefix
    Впоследствии эта процедура была модифицирована Weichselbaum и соавт., Gornall и соавт. Принцип метода заключается в том, что белок сыворотки в щелочной среде при взаимодействии с ионами меди образует фиолетовый комплекс
    Exact
    [3, 5–8]
    Suffix
    (таблица). Абсорбция образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации белка в исследуемом образце. Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения.

  2. In-text reference with the coordinate start=5299
    Prefix
    Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения. Для определения сывороточного альбумина методы фракционного высаливания были слишком трудоемки и заменены методами с применением азокрасителей. Использование реакции с бромкрезоловым зеленым
    Exact
    [6–8, 10]
    Suffix
    стало предпочтительным методом из-за высокой специфичности к альбумину и незначительному влиянию на данную реакцию гемолиза, билирубина и салицилатов. Суть метода заключается в избирательном взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым при рН 4,2 (таблица).

  3. In-text reference with the coordinate start=6675
    Prefix
    Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3]. В 1965 г. Talke и Shubert ввели общую энзиматическую процедуру с использованием уреазы и глутаматдегидрогеназы
    Exact
    [8]
    Suffix
    : мочевина гидролизуется уреазой, при этом образуется аммиак и углекислый газ. Выделенный аммиак в присутствии NADH1 взаимодействует с α-кетоглутаратом с образованием глутамата. В результате реакции NADH подвергается окислению, что сопровождается уменьшением абсорбции (оптический тест Варбурга [6]), интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации мочевины в исслед

  4. In-text reference with the coordinate start=7313
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические
    Exact
    [3, 6–8, 10]
    Suffix
    , энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  5. In-text reference with the coordinate start=7344
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические [3, 6–8, 10], энзиматические
    Exact
    [8]
    Suffix
    и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  6. In-text reference with the coordinate start=7550
    Prefix
    Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические [3, 6–8, 10], энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода
    Exact
    [8]
    Suffix
    . В присутствии пероксидазы перекись водорода инициирует присоединение 4-аминоантипирина к дихлор-2-гидроксибензолсульфонату натрия (ДХГБС) с образованием хромогена, абсорбция которого измеряется при 520 нм (таблица).

  7. In-text reference with the coordinate start=15125
    Prefix
    Концентрация хлоридов в сыворотке стабильна в течение одного дня при комнатной температуре (18–25 °С) и три месяца в холодильнике при –20 °С Таблица Принципы спектрофотометрического и энзиматического определения основных биохимических показателей сыворотки (плазмы) крови сельскохозяйственных животных (Продолжение) кратом натрия в щелочной среде (цветная реакция Яффе, метод Поппера)
    Exact
    [6, 8]
    Suffix
    с образованием окрашенного комплекса, поглощающего излучение при 510 нм (таблица). Скорость образования окраски пропорциональна концентрации креатинина в образце. ПОКАЗАТЕЛИ ПИГМЕНТНОГО ОБМЕНА Билирубин — желто-красный пигмент; представляет собой линейный тетрапиррол.

  8. In-text reference with the coordinate start=20188
    Prefix
    Данный метод оказывает меньшее влияние на результаты анализа и не имеет недостатков ранее предложенных методов: β-D-глюкоза окисляется глюкозооксидазой с образованием D-глюконовой кислоты и пероксида водорода [1]. В присутствии пероксидазы пероксид водорода, n-гидроксибензолсульфоновая кислота (n-ГБС), 4-аминоантипирин и фенол образуют хинониминовый красный краситель
    Exact
    [8]
    Suffix
    (табл.). Концентрация образовавшегося в результате реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации глюкозы. К числу спектрофотометрических методов, получивших широкое распространение, можно отнести метод определения глюкозы по цветной реакции с о-толуидином (метод Гультмана) [1, 6, 7], состоящий в определении интенсивности окрашенного раствора при взаимодействии о-тол

  9. In-text reference with the coordinate start=22000
    Prefix
    Затем в присутствии 4-аминоантипирина и натриевой соли этил-N-(2-гидрокси-3-сульфопропил)м-толуидина (TOOS) пероксидаза катализирует реакцию перекиси водорода с образованием окрашенного комплекса, абсорбция которого измеряется при 550 нм
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Абсорбция прямо пропорциональна концентрации лактата в исследуемом образце (таблица). ПОКАЗАТЕЛИ ОБМЕНА ЛИПИДОВ Триглицериды (триацилглицерины) — это нейтральные жиры, обеспечивающие клетки энергией.

  10. In-text reference with the coordinate start=22527
    Prefix
    Стандартные методы определения концентрации триглицеридов основаны на использовании как ферментного, так и щелочного гидролиза с высвобождением глицерина. Современные методы основаны на использовании энзиматического гидролиза
    Exact
    [8]
    Suffix
    и количественного определения содержания триглицеридов, так как они имеют высокую специфичность, и фосфолипиды не влияют на его результаты: триглицериды гидролизуются липазой, концентрация высвобождающегося глицерина определяется энзиматической реакцией, в результате которой образуется хинониминовый краситель (таблица).

  11. In-text reference with the coordinate start=23894
    Prefix
    Allian и соавт. разработали общий ферментативный метод, в котором при окислении холестерина в присутсвии пероксида водорода, пероксидазы, 4-аминоантипирина и фенола образуется хинониминовый краситель. Реагент содержит n-ГБС и фенол, образующие краситель с максимумом поглощения при 520 нм, а также сурфактант для обеспечения полного протекания реакции
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации холестерина в пробе. Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька [1, 3, 5–7, 9].

  12. In-text reference with the coordinate start=25710
    Prefix
    Поскольку данный метод достаточно трудоемкий, требует проведения стадии экстракции липидов (как правило по методу Фолча [3, 7]), в рутинных лабораторных исследованиях используют энзиматический метод
    Exact
    [8]
    Suffix
    , основанный на гидролизе ФЛ фосфолипазой. Высвобождающийся холин затем окисляется холиноксидазой в бетаин с образованием перекиси водорода. В присутствии пероксидазы перекись водорода связывается с 4-аминофеназоном и дихлорфенолом с формированием комплекса кинонимина, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации ФЛ (таблица).

  13. In-text reference with the coordinate start=27001
    Prefix
    Соотношение кальция и красителя для образования комплекса: одна часть образца на 100 частей реагента. В качестве комплексона при определении кальция может быть использован глиоксаль-бис-[2-оксианил] [3, 6] и о-крезолфталеин
    Exact
    [6, 8, 9]
    Suffix
    . Магний — это второй по распространенности внутриклеточный катион в организме животных и человека после калия, он участвует в большом количестве ферментативных и метаболических процессов. Метод определения концентрации магния впервые был предложен Kramer, Tisdall, Briggs и соавт. в 20-х гг.

  14. In-text reference with the coordinate start=28123
    Prefix
    Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала. Совсем недавно был предложен спектрофотометрический метод, который стал наиболее популярным. В качестве окрашивающих агентов используют кальмагит, ксилидиловый голубой
    Exact
    [8]
    Suffix
    , эриохромовый черный Т, магон [6] или метилтимоловый голубой. При использовании металлохромного индикатора кальмагита нет необходимости проводить депротеинизацию, и результаты анализа имеют высокую сходимость с данными атомной абсорбции: ионы магния реагируют с кальмагитом в щелочной среде, при этом формируется комплекс, имеющий красное окрашивание (табл.

  15. In-text reference with the coordinate start=29210
    Prefix
    Определение содержания неорганического фосфора в сыворотке крови основано на взаимодействии молибдата аммония с фосфатами в кислой среде с образованием фосфорномолибденового комплекса, имеющего синюю окраску, без проведения депротеинизации
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Поглощение при 340 нм прямо пропорционально количеству неорганического фосфора, содержащегося в образце (таблица). Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой [1, 7].

  16. In-text reference with the coordinate start=31108
    Prefix
    В настоящее время количество калия определяется с помощью тетрафенилбората натрия в специально приготовленной смеси для получения коллоидных взвесей, мутность которой пропорциональна концентрации калия в диапазоне от 2 до 7 мэкв/л
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Железо — микроэлемент, содержащийся в организме в наибольшем количестве. Основная часть железа расположена внутри гема в гемоглобине, каталазе, миоглобине, пероксидазе и цитохромах. Железо аккумулируется в форме, связанной с ферритином или гемосидерином, а переносится с помощью трансферрина.

  17. In-text reference with the coordinate start=32175
    Prefix
    Определение железа основано на том, что при добавлении содержащего гидроксиламин кислотного буферного раствора железо сыворотки высвобождается из Fe3+-трансферринового комплекса. Железо (III) восстанавливается до железа (II). Ионы железа реагируют с окрашенным агентом (феррозин), что приводит к образованию яркоокрашенного комплекса
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Абсорбция измеряется фотометрически при длине волны 560 нм (таблица). В качестве альтернативного можно использовать метод определения железа по цветной реакции с β-фенантролином [3, 6, 7]: белки осаждают трихлоруксусной кислотой, которая при прогревании разрушает комплекс железа с трансферрином.

  18. In-text reference with the coordinate start=33834
    Prefix
    Большее распространение в биохимическом анализе получил метод, предложенный в 1950 г., в основе которого лежит следующий принцип: ионы хлора замещают тиоцианат из неионизированного тиоцианата ртути, при этом образуется хлорид ртути и тиоцианат-ионы
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Образовавшиеся тиоцианат-ионы реагируют с ионами железа с формированием окрашенного комплекса, максимум светопоглощения которого приходится на 480 нм. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации хлоридов в исследуемой сыворотке крови.

  19. In-text reference with the coordinate start=34518
    Prefix
    фосфатаза (ЩФ) (фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кислоты, фосфомоноэстераза 1) — фермент гидролаза, отщепляющий фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов. Фермент проявляет наибольшую активность в щелочной среде (рН от 8,6 до 10,1). Концентрация ЩФ определяется по изменению скорости гидролиза различных фосфатных эфиров
    Exact
    [5–9]
    Suffix
    . n-Нитрофенилфосфат — один из таких эфиров, использовался как субстрат Fujita в 1939 г. Bowers и McComb в дальнейшем модифицировали процедуру кинетического анализа. В 1974 г. Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного.

  20. In-text reference with the coordinate start=35083
    Prefix
    Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного. Скорость увеличения поглощения излучения при 405 нм, обусловленная образованием n-нитрофенола в процессе гидролиза n-нитрофенилфосфата, пропорциональна активности фермента
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Более известен как метод Бессея–Лоури–Брока [1, 3]. В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически [3, 6–7, 9].

  21. In-text reference with the coordinate start=36490
    Prefix
    лития в пируват предпочтительнее, так как: 1) скорость реакции линейна на широком диапазоне активности фермента, 2) не требуется предварительная инкубация реакционной среды, 3) реагенты более стабильны. Кинетический метод основан на том, что ЛДГ катализирует окисление L-лактата до пирувата в присутствии NAD, который одновременно восстанавливается до NADH (оптический тест Варбурга)
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности ЛДГ в сыворотке. Широкое распространение получил и динитрофенилгидразиновый метод [1, 3, 6, 7], основанный на определении пирувата (пировиноградной кислоты) по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (метод Севела–Товарека).

  22. In-text reference with the coordinate start=37735
    Prefix
    Затем АТФ и глюкоза превращаются в АДФ и глюкозо-6-фосфат при участии гексокиназы. Глюкозо-6-фосфат окисляется до 6-фосфоглюконата под действием глюкозо-6фосфат-дегидрогеназы, что приводит к уменьшению содержания NAD
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Концентрация NADH, измеренная при 340 нм, прямо пропорциональна активности КК в сыворотке. α-Амилаза (1,4-α-D-глюкан-глюканогидролаза) — один из первых открытых ферментов; катализирует эндогидролиз α-1,4-глюкозидных связей крахмала, гликогена и родственных им полисахаридов до мальтозы, декстринов и других полимеров.

  23. In-text reference with the coordinate start=38327
    Prefix
    В основе спектрофотометрического метода определения амилазы лежит реакция гидролиза 2-хлор-4нитрофенил-α-D-мальтатриозида α-амилазой с высвобождением 2-хлор-4-нитрофенила (ХНФ) и образованием 2-хлор-4-нитрофенил-α-D-мальтозида, мальтотриозы и глюкозы
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Скорость образования ХНФ измеряется фотометрически, величина поглощения пропорциональна коцентрации амилазы в образце (таблица). Активность амилазы может быть оценена амилоклассическим методом и методом Каравея (со стойким крахмальным субстратом) [1, 3, 6, 7], основанным на фотометрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза.

  24. In-text reference with the coordinate start=39426
    Prefix
    Принцип метода основан на каталитической реакции переноса аминогруппы с L-аланина на α-кетоглутарат с образованием пирувата и L-глутамата под действием АлАТ. ЛДГ подвергается окислению, при этом NADН окисляется до NAD. Уровень снижения абсорбции прямо пропорционален активности АлАТ
    Exact
    [6, 8, 10]
    Suffix
    . Первые кинетические измерения активности АсАТ в диагностических целях были описаны Karmen и соавт. В 1955 г. они проводились с использованием сопряженной реакции в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ) и NADH.

  25. In-text reference with the coordinate start=39849
    Prefix
    Данная система измерения была значительно улучшена и оптимизирована в 1960 г. Henry и соавт. В 1977 г. МФКХ рекомендовала референсный метод для измерения активности АсАТ, основанный на методе Karmen
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Ферментативный метод определения концентрации АсАТ основан на следующей последовательности реакций: АсАТ катализирует перенос аминогруппы между L-аспартатом и 2-оксоглутаратом. Образующийся в первой реакции оксалоацетат реагирует с NADH в присутствии МДГ с образованием NAD.

9
Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях: утв. ГУВ МСХ СССР 03.04.1981 г. / В.Т. Самохин, П.Е. Петров, И.М. Беляков [и др.]. — М.: ВАСХНИЛ, 1981. — 87 с.
Total in-text references: 9
  1. In-text reference with the coordinate start=6292
    Prefix
    Синтез мочевины происходит в печени главным образом из аммиака, который образуется при дезаминировании аминокислот, распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Мочевину определяют прямым методом, в котором при взаимодействии с диацетилом (или диацетилмонооксимом) образуется хромоген
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    , и непрямым методом, в котором измеряют концентрацию аммиака как продукта воздействия уреазы на мочевину. Выделенный аммиак можно измерить фотометрически с использованием реактива Несслера и по реакции Berthelot с гипохлоритом и фенолом [3].

  2. In-text reference with the coordinate start=8548
    Prefix
    Он основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовую кислоту 1 NAD (НАД) — никотинамидадениндинуклеотид (существует в двух формах: окисленной (NAD+) и восстановленной (NADH)). с образованием окрашенного соединения. Впоследствии метод подвергался многочисленным модификациям и до настоящего времени остается одним из наиболее распространенных
    Exact
    [3, 6, 7, 9]
    Suffix
    . Креатинин — конечный продукт креатин-фосфатной реакции: креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, из которого образуется креатинин (ангидрид креатина). Креатинин участвует в энергетическом обмене мышечной и других тканей.

  3. In-text reference with the coordinate start=24243
    Prefix
    Реакции получения хромогена предшествует гидролиз эфиров холестерина с образованием холестерина (таблица). Несмотря на высокую специфичность энзиматических методов, большое распространение для определения холестерина в сыворотке крови получил метод Илька
    Exact
    [1, 3, 5–7, 9]
    Suffix
    . В его основу положена модифицированная реакция Либермана–Бурхарда, которая приводит к изумрудно-зеленому окрашиванию раствора в присутствии холестерина и смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты.

  4. In-text reference with the coordinate start=27001
    Prefix
    Соотношение кальция и красителя для образования комплекса: одна часть образца на 100 частей реагента. В качестве комплексона при определении кальция может быть использован глиоксаль-бис-[2-оксианил] [3, 6] и о-крезолфталеин
    Exact
    [6, 8, 9]
    Suffix
    . Магний — это второй по распространенности внутриклеточный катион в организме животных и человека после калия, он участвует в большом количестве ферментативных и метаболических процессов. Метод определения концентрации магния впервые был предложен Kramer, Tisdall, Briggs и соавт. в 20-х гг.

  5. In-text reference with the coordinate start=27644
    Prefix
    Впоследствии было разработано несколько методик его определения: комплексонометрическое титрование с ЭДТА, флюориметрическая процедура с использованием специфических хелатирующих агентов и спектрофотометрический метод, в основе которого лежит реакция титана желтого и гидроксида магния с образованием красного пигмента
    Exact
    [3, 5–7, 9]
    Suffix
    . Все эти методы имели недостатки, которые отражались на точности результатов. Атомная абсорбция является методом, позволяющим наиболее точно определять концентрацию магния. Данный метод требует дорогостоящего оборудования и большого объема исследуемого материала.

  6. In-text reference with the coordinate start=29597
    Prefix
    Возможно последующее восстановление полученного комплекса эйконогеном [3] или аскорбиновой кислотой [1, 7]. Неорганический фосфор в сыворотке крови может быть определен и с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой)
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии [5–7, 9], который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени.

  7. In-text reference with the coordinate start=29848
    Prefix
    Кудрявцевой) [5–7, 9], с которым фосфор дает лимонножелтое окрашивание. Максимум светопоглощения комплекса приходится на 420 нм. Калий и натрий. Традиционно измерение концентрации натрия и калия в биологических жидкостях проводится методом пламенной фотометрии
    Exact
    [5–7, 9]
    Suffix
    , который представляет собой один из видов эмиссионного спектрального анализа, основанного на фотометрировании излучения элементов в пламени. Натрий окрашивает пламя в ярко-желтый цвет, а калий — в слабый красно-фиолетовый.

  8. In-text reference with the coordinate start=34518
    Prefix
    фосфатаза (ЩФ) (фосфогидролаза моноэфиров ортофосфорной кислоты, фосфомоноэстераза 1) — фермент гидролаза, отщепляющий фосфат (дефосфорилирование) от многих типов молекул, например, нуклеотидов, белков и алкалоидов. Фермент проявляет наибольшую активность в щелочной среде (рН от 8,6 до 10,1). Концентрация ЩФ определяется по изменению скорости гидролиза различных фосфатных эфиров
    Exact
    [5–9]
    Suffix
    . n-Нитрофенилфосфат — один из таких эфиров, использовался как субстрат Fujita в 1939 г. Bowers и McComb в дальнейшем модифицировали процедуру кинетического анализа. В 1974 г. Комитет по энзимологии Скандинавского общества клинической химии и клинической физиологии принял модификацию данного метода и рекомендовал его в качестве референсного.

  9. In-text reference with the coordinate start=35384
    Prefix
    В качестве других энзиматических методов можно использовать метод Боданского и Кинга–Армстронга. Метод Боданского основан на ферментативном гидролизе β-глицерофосфата с освобождением неорганического фосфора, определяемого фотометрически
    Exact
    [3, 6–7, 9]
    Suffix
    . А в основе метода Кинга–Армстронга лежит ферментативное расщепление фенилфосфата [3, 6]. Освобожденный в результате реакции фенол определяют фотометрически с реактивом Фолина. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (L-лактат: NADоксидоредуктаза) — гликолитический фермент, открытый Мейергофом в 1918 г., катализирует обратимую реакцию восстановления пировиноградной кислоты в молочную.

10
Об унификации клинических лабораторных методов исследования (вместе с «Методическими указаниями по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования»): Приказ Минздрава СССР от 21.11.1979 г. No1175.
Total in-text references: 4
  1. In-text reference with the coordinate start=5299
    Prefix
    Альбумин — простой белок, синтезирующийся в печени; в плазме крови поддерживает коллоидно-осмотическое давление, играет важную роль в транспорте многих веществ экзогенного и эндогенного происхождения. Для определения сывороточного альбумина методы фракционного высаливания были слишком трудоемки и заменены методами с применением азокрасителей. Использование реакции с бромкрезоловым зеленым
    Exact
    [6–8, 10]
    Suffix
    стало предпочтительным методом из-за высокой специфичности к альбумину и незначительному влиянию на данную реакцию гемолиза, билирубина и салицилатов. Суть метода заключается в избирательном взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым при рН 4,2 (таблица).

  2. In-text reference with the coordinate start=7313
    Prefix
    Мочевая кислота является конечным продуктом распада пуриновых оснований. Образовавшаяся мочевая кислота выделяется почками. Для определения мочевой кислоты в сыворотке крови используются спектрофотометрические
    Exact
    [3, 6–8, 10]
    Suffix
    , энзиматические [8] и другие методы. Наиболее специфические и точные — ферментативные (уреазные) методы. В основе определения лежит реакция окисления мочевой кислоты уриказой до аллантоина и перекиси водорода [8].

  3. In-text reference with the coordinate start=23179
    Prefix
    При использовании химических методов глицерин, освобожденный омылением триглицеридов, окисляют до формальдегида, концентрация последнего определяется спектрофотометрически с применением реакции Hantzch (метод Сардесая–Маннинга) [7], по цветной реакции с хромотроповой кислотой [3] или ацетилацетоном
    Exact
    [10]
    Suffix
    . Холестерин представляет собой вторичный одноатомный ароматический спирт, в молекуле которого имеется общее для всех стеринов полициклическое ядро циклопентанпергидрофенантрена. Энзиматические методы определения содержания холестерина, основанные на использовании холестеринэстеразы, оксидазы и реакции Триндера, вытеснили более ранние методы.

  4. In-text reference with the coordinate start=39426
    Prefix
    Принцип метода основан на каталитической реакции переноса аминогруппы с L-аланина на α-кетоглутарат с образованием пирувата и L-глутамата под действием АлАТ. ЛДГ подвергается окислению, при этом NADН окисляется до NAD. Уровень снижения абсорбции прямо пропорционален активности АлАТ
    Exact
    [6, 8, 10]
    Suffix
    . Первые кинетические измерения активности АсАТ в диагностических целях были описаны Karmen и соавт. В 1955 г. они проводились с использованием сопряженной реакции в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ) и NADH.