The 33 reference contexts in paper S. Ponomarenko V., С. Пономаренко В. (2018) “Экономические барьеры, тормозящие производство терапевтического рекомбинантного трипсина человека. Применение инновационных технологий для их преодоления // Economic barriers restraining the production of therapeutic recombinant human trypsin. Use of innovative technologies to overcome them” / spz:neicon:pharmacoeconomics:y:2018:i:3:p:58-66

  1. Start
    6524
    Prefix
    Он является очень важным для животных организмов ферментом – гидролизует белки, расщепляя их пептидные цепи на карбоксильном фланге аминокислот лизина или аргинина, за исключением некоторых случаев
    Exact
    [1,2]
    Suffix
    . Установлена трехмерная структура трипсина, которая имеет несколько дисульфидных связей [3]. Трипсины млекопитающих гомологичны по структуре и проявляют одинаковый механизм ферментативной реакции [2,4].
    (check this in PDF content)

  2. Start
    6620
    Prefix
    Он является очень важным для животных организмов ферментом – гидролизует белки, расщепляя их пептидные цепи на карбоксильном фланге аминокислот лизина или аргинина, за исключением некоторых случаев [1,2]. Установлена трехмерная структура трипсина, которая имеет несколько дисульфидных связей
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Трипсины млекопитающих гомологичны по структуре и проявляют одинаковый механизм ферментативной реакции [2,4]. Трипсины животных экстрагируют из их желез и последовательно очищают методами, использующими особенности физико-химических свойств этого протеина [5-9].
    (check this in PDF content)

  3. Start
    6727
    Prefix
    Установлена трехмерная структура трипсина, которая имеет несколько дисульфидных связей [3]. Трипсины млекопитающих гомологичны по структуре и проявляют одинаковый механизм ферментативной реакции
    Exact
    [2,4]
    Suffix
    . Трипсины животных экстрагируют из их желез и последовательно очищают методами, использующими особенности физико-химических свойств этого протеина [5-9]. Поджелудочная железа (ПЖ) животных производит большое количество трипсина, который у млекопитающих транслируется как неактивный профермент трипсиноген.
    (check this in PDF content)

  4. Start
    6880
    Prefix
    Трипсины млекопитающих гомологичны по структуре и проявляют одинаковый механизм ферментативной реакции [2,4]. Трипсины животных экстрагируют из их желез и последовательно очищают методами, использующими особенности физико-химических свойств этого протеина
    Exact
    [5-9]
    Suffix
    . Поджелудочная железа (ПЖ) животных производит большое количество трипсина, который у млекопитающих транслируется как неактивный профермент трипсиноген. Он транспортируется в кишечник, где активируется мембранно-связанной протеазой (энтеропептидазой) с формированием активного фермента [10].
    (check this in PDF content)

  5. Start
    7169
    Prefix
    Поджелудочная железа (ПЖ) животных производит большое количество трипсина, который у млекопитающих транслируется как неактивный профермент трипсиноген. Он транспортируется в кишечник, где активируется мембранно-связанной протеазой (энтеропептидазой) с формированием активного фермента
    Exact
    [10]
    Suffix
    . Образованный трипсин обладает высокой каталитической активностью и способен активировать как сам трипсиноген, так и другие зимогены [10-12]. Трипсин играет ключевую роль не только в пищеварительном процессе, он также незаменим в ряде важных биохимических реакций организма.
    (check this in PDF content)

  6. Start
    7307
    Prefix
    Он транспортируется в кишечник, где активируется мембранно-связанной протеазой (энтеропептидазой) с формированием активного фермента [10]. Образованный трипсин обладает высокой каталитической активностью и способен активировать как сам трипсиноген, так и другие зимогены
    Exact
    [10-12]
    Suffix
    . Трипсин играет ключевую роль не только в пищеварительном процессе, он также незаменим в ряде важных биохимических реакций организма. У млекопитающих обнаружено несколько изоформ этого энзима [13-15].
    (check this in PDF content)

  7. Start
    7504
    Prefix
    Образованный трипсин обладает высокой каталитической активностью и способен активировать как сам трипсиноген, так и другие зимогены [10-12]. Трипсин играет ключевую роль не только в пищеварительном процессе, он также незаменим в ряде важных биохимических реакций организма. У млекопитающих обнаружено несколько изоформ этого энзима
    Exact
    [13-15]
    Suffix
    . В организме человека превалирует производство трипсина 1 бета (Trp1) [11]. Синтез его предшественника, катионического трипсиногена, кодируется геном PRSS1 (или TRP1), который находится в хромосоме 7 генома человека [1].
    (check this in PDF content)

  8. Start
    7582
    Prefix
    Трипсин играет ключевую роль не только в пищеварительном процессе, он также незаменим в ряде важных биохимических реакций организма. У млекопитающих обнаружено несколько изоформ этого энзима [13-15]. В организме человека превалирует производство трипсина 1 бета (Trp1)
    Exact
    [11]
    Suffix
    . Синтез его предшественника, катионического трипсиногена, кодируется геном PRSS1 (или TRP1), который находится в хромосоме 7 генома человека [1]. Чаще всего, особенно для медицинских исследований, рекомбинантный трипсин человека (рТч) экспрессируется как Trp1.
    (check this in PDF content)

  9. Start
    7728
    Prefix
    В организме человека превалирует производство трипсина 1 бета (Trp1) [11]. Синтез его предшественника, катионического трипсиногена, кодируется геном PRSS1 (или TRP1), который находится в хромосоме 7 генома человека
    Exact
    [1]
    Suffix
    . Чаще всего, особенно для медицинских исследований, рекомбинантный трипсин человека (рТч) экспрессируется как Trp1. Протеолитик Trp1 – наиболее изученный белок из субсемейства трипсинов в генетике, молекулярной биологии, биохимии и физио- логии, о нем получено больше клинических данных, чем для других изоформ [15-16].
    (check this in PDF content)

  10. Start
    8041
    Prefix
    Протеолитик Trp1 – наиболее изученный белок из субсемейства трипсинов в генетике, молекулярной биологии, биохимии и физио- логии, о нем получено больше клинических данных, чем для других изоформ
    Exact
    [15-16]
    Suffix
    . Трипсин в качестве лекарства применяется с конца 30-х гг. прошлого столетия не только per os для улучшения пищеварения, но внутримышечно, внутривенно, а также в виде ингаляций, орошений и аппликаций [17-18].
    (check this in PDF content)

  11. Start
    8244
    Prefix
    Трипсин в качестве лекарства применяется с конца 30-х гг. прошлого столетия не только per os для улучшения пищеварения, но внутримышечно, внутривенно, а также в виде ингаляций, орошений и аппликаций
    Exact
    [17-18]
    Suffix
    . Его назначают как тромболитический, противовоспалительный, болеутоляющий и противоотечный препарат при лечении тромбозов, ран и ожогов (табл. 1). Эта эндопептидаза разрушает некоторые вирусы и бактериальные токсины, а также избирательно расщепляет некротированные ткани [19].
    (check this in PDF content)

  12. Start
    8520
    Prefix
    Его назначают как тромболитический, противовоспалительный, болеутоляющий и противоотечный препарат при лечении тромбозов, ран и ожогов (табл. 1). Эта эндопептидаза разрушает некоторые вирусы и бактериальные токсины, а также избирательно расщепляет некротированные ткани
    Exact
    [19]
    Suffix
    . Трипсин используют в терапии генетических болезней, вызванных дефицитом или отсутствием протеаз, таких как муковисцидоз, наследственный панкреатит [20-21]. К сожалению, доступной информации о его применении недостаточно, чтобы прогнозировать рынок терапевтического рТч.
    (check this in PDF content)

  13. Start
    8673
    Prefix
    Эта эндопептидаза разрушает некоторые вирусы и бактериальные токсины, а также избирательно расщепляет некротированные ткани [19]. Трипсин используют в терапии генетических болезней, вызванных дефицитом или отсутствием протеаз, таких как муковисцидоз, наследственный панкреатит
    Exact
    [20-21]
    Suffix
    . К сожалению, доступной информации о его применении недостаточно, чтобы прогнозировать рынок терапевтического рТч. Трипсин используется во многочисленных биотехнологических процессах, таких как производство рекомбинантных белков, в т. ч. фармацевтических.
    (check this in PDF content)

  14. Start
    9082
    Prefix
    Трипсин используется во многочисленных биотехнологических процессах, таких как производство рекомбинантных белков, в т. ч. фармацевтических. Так, в 2015 г. для производства рекомбинантного инсулина требовалось более 50 кг высокоочищенного, в соответствии с требованиями ЕМА или FDA, трипсина
    Exact
    [22]
    Suffix
    . Такого же качества протеаза требуется в большом количестве для трипсинолиза в производстве других терапевтических белков и вакцин. Этот энзим используют в анализах разного типа, например, для подтверждения первичной структуры белков, так как он высокоспецефично расщепляет пептиды после аргинина или лизина [2,23].
    (check this in PDF content)

  15. Start
    9393
    Prefix
    Такого же качества протеаза требуется в большом количестве для трипсинолиза в производстве других терапевтических белков и вакцин. Этот энзим используют в анализах разного типа, например, для подтверждения первичной структуры белков, так как он высокоспецефично расщепляет пептиды после аргинина или лизина
    Exact
    [2,23]
    Suffix
    . Почти весь коммерческий трипсин выделяют из ПЖ свиней или крупного рогатого скота (КРС), хотя в последнее время растет количество и качество промышленных протеаз, вырабатываемых из растений или микроорганизмов.
    (check this in PDF content)

  16. Start
    12195
    Prefix
    Препараты, содержащие трипсин, применяются более 80 лет. Чтобы защитить пациентов США от протеазы низкого качества, FDA приняла решение в 2006 г. о регистрации лекарственных препаратов из ПЖ как новых
    Exact
    [25]
    Suffix
    . Развитие биофармацевтических технологий способствует тому, что в скором времени не только трипсин, но и другие новые терапевтические протеазы будут генно-инженерными. Основные производители и рынок рекомбинантного трипсина Крупные производители рекомбинантных энзимов – Novozymes, Thermo Fisher, Roche, BBI Group, Merck, Biological Industries, Shanghai Yaxin Biotechnology CoLtd и др. [26] –
    (check this in PDF content)

  17. Start
    12582
    Prefix
    Основные производители и рынок рекомбинантного трипсина Крупные производители рекомбинантных энзимов – Novozymes, Thermo Fisher, Roche, BBI Group, Merck, Biological Industries, Shanghai Yaxin Biotechnology CoLtd и др.
    Exact
    [26]
    Suffix
    – производят коммерческие генно-инженерные трипсины свиньи, человека, КРС и других животных в зависимости от интересов заказчика, но, как было уже указано, для медицины и процессинга биофармацевтиков наиболее полезен рТч.
    (check this in PDF content)

  18. Start
    13718
    Prefix
    Разброс коммерческих цен на очищенный трипсин [30-35] может достигать 3-4 порядков (рис. 1). имеют радикальное значение. Ведущие производители промышленных ферментов в США и ЕС: Novozymes (Дания), Danisco (Дания), Genencor (США), DSM (Нидерланды) и BASF (Германия)
    Exact
    [24]
    Suffix
    . Эти же фирмы производят трипсин, в т. ч. для терапии разных заболеваний (см. табл. 1). В медицинской практике разрешен трипсин кристаллический (как для местного, так и для парентерального применения) и трипсин аморфный (только для местного применения).
    (check this in PDF content)

  19. Start
    17114
    Prefix
    железы Ферментные растворы, гели или мази Терапия кожных тканей Гнойные раны и ожоги Некрэктомия и диабетическая стопа Флегмоны, абсцессы, маститы Язвы, пролежни, склеродермии ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2018; Том 11, No 3 www.pharmacoeconomics.ru ный выход высокоочищенного рекомбинантного трипсина в тысячи раз ниже, чем других биофармацевтиков
    Exact
    [22]
    Suffix
    . Основной причиной таких потерь целевого белка является ферментативный аутокатализ трипсина по указанным аминокислотным остаткам [10,12]. Поэтому блокирование или значительное замедление аутокаталитической реакции эндопептидазы необходимо для предотвращения губительных потерь целевого продукта при производстве и хранении [10,36].
    (check this in PDF content)

  20. Start
    17247
    Prefix
    Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2018; Том 11, No 3 www.pharmacoeconomics.ru ный выход высокоочищенного рекомбинантного трипсина в тысячи раз ниже, чем других биофармацевтиков [22]. Основной причиной таких потерь целевого белка является ферментативный аутокатализ трипсина по указанным аминокислотным остаткам
    Exact
    [10,12]
    Suffix
    . Поэтому блокирование или значительное замедление аутокаталитической реакции эндопептидазы необходимо для предотвращения губительных потерь целевого продукта при производстве и хранении [10,36].
    (check this in PDF content)

  21. Start
    17760
    Prefix
    Трипсин, как и другие рекомбинантные полипептиды, синтезируют в гетерологичных клетках, затем его выделяют и очищают Исходя из объемов продаж рекомбинантного трипсина и данных о решениях FDA и ЕМА
    Exact
    [25]
    Suffix
    , становится ясно, что мировой рынок лекарственного рТч практически не существует. Поэтому еще рано судить об объемах его продаж и прогнозировать непосредственно динамику его потребления. Можно примерно оценить потребность для пула зарегистрированных больных с тромбофлебитом или генетическими нарушениями.
    (check this in PDF content)

  22. Start
    18964
    Prefix
    Необходимо развивать инновационные технологии для снижения стоимости производства рТч, что приведет к увеличению глобального применения этой протеазы в терапии различных болезней (см. табл. 1). Особенности производства рекомбинантного трипсина Trp1 – это белок, состоящий из 224 аминокислотных остатков с молекулярной массой 23 КДа
    Exact
    [1]
    Suffix
    , среди которых шесть аргининов и 13 лизинов. В катионическом трипсиногене человека содержится 20 этих диаминокарбоновых аминокислот, по которым фермент способен аутогидролизоваться, и скорость образования может быть для разных пептидных фрагментов очень быстрой, быстрой или медленной в зависимости от структурных особенностей белка [23].
    (check this in PDF content)

  23. Start
    19298
    Prefix
    В катионическом трипсиногене человека содержится 20 этих диаминокарбоновых аминокислот, по которым фермент способен аутогидролизоваться, и скорость образования может быть для разных пептидных фрагментов очень быстрой, быстрой или медленной в зависимости от структурных особенностей белка
    Exact
    [23]
    Suffix
    . Обычно в производстве терапевтических белков наиболее затратным является down-stream-процесс и его оптимизация позволяет в значительной мере снизить производственные затраты [22]. Цены на высокоочищенный трипсин в несколько тысяч раз выше [29-35], чем на первичный (см. рис. 1), что свидетельствует о гигантских потерях целевого белка в down-stream-процессе.
    (check this in PDF content)

  24. Start
    19477
    Prefix
    аминокислот, по которым фермент способен аутогидролизоваться, и скорость образования может быть для разных пептидных фрагментов очень быстрой, быстрой или медленной в зависимости от структурных особенностей белка [23]. Обычно в производстве терапевтических белков наиболее затратным является down-stream-процесс и его оптимизация позволяет в значительной мере снизить производственные затраты
    Exact
    [22]
    Suffix
    . Цены на высокоочищенный трипсин в несколько тысяч раз выше [29-35], чем на первичный (см. рис. 1), что свидетельствует о гигантских потерях целевого белка в down-stream-процессе. КонечРисунок 1.
    (check this in PDF content)

  25. Start
    21926
    Prefix
    ПЖ – поджелудочная железа; ФАС – фармацевтически активная субстанция. Note. ПЖ – pancreas; ФАС – pharmaceutically active substance. са. Следует отметить, что угроза аутогидролиза сохраняется для трипсина всех животных
    Exact
    [11-12]
    Suffix
    и для описанных технологий производства протеазы. Однако аутокаталитическая деградация трипсиногена в 10 раз ниже, чем активного трипсина, что объясняет большие потери целевого продукта из животного сырья [6-7].
    (check this in PDF content)

  26. Start
    22138
    Prefix
    Следует отметить, что угроза аутогидролиза сохраняется для трипсина всех животных [11-12] и для описанных технологий производства протеазы. Однако аутокаталитическая деградация трипсиногена в 10 раз ниже, чем активного трипсина, что объясняет большие потери целевого продукта из животного сырья
    Exact
    [6-7]
    Suffix
    . Для промышленных целей производят трипсин и очень редко – трипсиноген из ПЖ [7]. Практика показывает, что аутопротеолиз выделяемых протеаз трудно предотвратить, поэтому методы, принципиально снижающие аутокатализ трипсина, можно использовать в производстве других рекомбинантных энзимов.
    (check this in PDF content)

  27. Start
    22219
    Prefix
    Однако аутокаталитическая деградация трипсиногена в 10 раз ниже, чем активного трипсина, что объясняет большие потери целевого продукта из животного сырья [6-7]. Для промышленных целей производят трипсин и очень редко – трипсиноген из ПЖ
    Exact
    [7]
    Suffix
    . Практика показывает, что аутопротеолиз выделяемых протеаз трудно предотвратить, поэтому методы, принципиально снижающие аутокатализ трипсина, можно использовать в производстве других рекомбинантных энзимов.
    (check this in PDF content)

  28. Start
    23921
    Prefix
    Критически высокозатратными являются при получении рекомбинантного белка из e. coli несколько фаз down-stream-процесса: фолдинг трипсиногена, очистка и полишинг, а также кристаллизация трипсина (см. табл. 2). Трипсин человека для своей биологически активной структуры образует пять дисульфидных мостиков
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Такое количество цистеинов затрудняет реакцию правильной укладки молекулы in vitro, а также ведет к образованию большого числа структурных изоформ. Требуется инновационный метод для повышения эффективности фолдинга трипсиногена, образующего тельца вклютрадиционными методами [24], однако в технологии его производства имеется несколько проблемных фаз (табл. 2).
    (check this in PDF content)

  29. Start
    24202
    Prefix
    Такое количество цистеинов затрудняет реакцию правильной укладки молекулы in vitro, а также ведет к образованию большого числа структурных изоформ. Требуется инновационный метод для повышения эффективности фолдинга трипсиногена, образующего тельца вклютрадиционными методами
    Exact
    [24]
    Suffix
    , однако в технологии его производства имеется несколько проблемных фаз (табл. 2). Для биосинтеза рекомбинантного трипсина в промышленных масштабах применяются преимущественно две системы экспрессии.
    (check this in PDF content)

  30. Start
    25498
    Prefix
    Поэтому бактериальная экспрессионная система экономически выгодна для многих терапевтических биофармацевтиков и также для производства рТч (см. табл. 3) [22,39-41]. Общая технологическая схема изготовления рекомбинантных ферментов экспрессией в микроорганизмах приведена в работе
    Exact
    [24]
    Suffix
    . В таблице 2 сравниваются три способа производства трипсина, их up-steam- и down-steam-процессы. Технология производства трипсина, экспрессированного в бактериях, имеет больше down-steam-фаз (см. табл. 2.
    (check this in PDF content)

  31. Start
    27544
    Prefix
    Высокозатратный фолдинг трипсиногена ПреимуществаВыделяют и очищают натуральный, биологически активный трипсин Не требуется фолдинг полипептида in vitro. Вырабатывается рекомбинантный трипсин Высокая экспрессия и продукция белка, идентичного трипсину человека Ссылки
    Exact
    [5-9]
    Suffix
    [37-38][39-41] ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2018; Том 11, No 3 www.pharmacoeconomics.ru макоэкономических и других исследований, подтверждающих потребность и преимущество терапии рТч, как это было выполнено для других рекомбинантных терапевтиков, вызывает у инвестора определенный уровень неуверенности в выгодной реализации проекта.
    (check this in PDF content)

  32. Start
    31838
    Prefix
    Производство значительного сегмента рекомбинантных биофармацевтиков требует длительный горизонт инвестиций, так как необходимы: крупномасштабное финансирование от начала проекта; большие производственные расходы и высококвалифицированные специалисты [22,42]. Сравнивалась эффективность энзимных препаратов при терапии муковисцидоза
    Exact
    [21]
    Suffix
    . Было показано, что рТч и трипсин КРС проявляют одинаковое сродство к рецепторам клеток человека и близкую скорость их активации [13]. Фармакоэкономический анализ трипсиновых препаратов, включая инвазивный рТч, является задачей для заинтересованных организаций.
    (check this in PDF content)

  33. Start
    31969
    Prefix
    Сравнивалась эффективность энзимных препаратов при терапии муковисцидоза [21]. Было показано, что рТч и трипсин КРС проявляют одинаковое сродство к рецепторам клеток человека и близкую скорость их активации
    Exact
    [13]
    Suffix
    . Фармакоэкономический анализ трипсиновых препаратов, включая инвазивный рТч, является задачей для заинтересованных организаций. Отсутствие фарТаблица 4. SWOT-анализ проекта производства рТч.  Table 4.
    (check this in PDF content)