The 23 reference contexts in paper T. Vishnevskaya V., O. Massalova V., S. Alkhovsky V., A. Pichyugin V., T. Shkurko V., E. Kelly P., R. Ataullakhanov I., N. Blokhina P., A. Kushch A., Т. Вишневская В., О. Масалова В., С. Альховский В., А. Пичугин В., Т. Шкурко В., Е. Келли И., Р. Атауллаханов И., Н. Блохина П., А. Кущ А. (2014) “ВЫЯВЛЕНИЕ МАРКЕРОВ РЕПЛИКАЦИИ ВИРУСА ГЕПАТИТА С В МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТКАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С // DETECTION OF HEPATITIS C VIRUS-SPECIFIC REPLICATION MARKERS IN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEARS FROM THE PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS C” / spz:neicon:mimmun:y:2008:i:5:p:397-404

  1. Start
    5570
    Prefix
    В то же время точно не определено, в каком функциональном состоянии находится вирус в мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) и какое влияние он оказывает на специфическую активность пораженных клеток внепеченочной локализации. Предполагают, что МКПК являются резервуаром ВГС и играют ключевую роль в возникновении рецидивов после IFN-терапии или трансплантации печени
    Exact
    [9, 19]
    Suffix
    . Некоторые исследователи полагают, что присутствие вирусной РНК в мононуклеарных клетках объясняется пассивным включением вируса путем эндоцитоза [6] или контаминацией клеток циркулирующим вирусом [15].
    (check this in PDF content)

  2. Start
    5729
    Prefix
    Предполагают, что МКПК являются резервуаром ВГС и играют ключевую роль в возникновении рецидивов после IFN-терапии или трансплантации печени [9, 19]. Некоторые исследователи полагают, что присутствие вирусной РНК в мононуклеарных клетках объясняется пассивным включением вируса путем эндоцитоза
    Exact
    [6]
    Suffix
    или контаминацией клеток циркулирующим вирусом [15]. В настоящее время основным доказательством репликации является обнаружение репликативной, или минус-цепи РНК ВГС, однако экспериментальные данные, полученные относительно минус-РНК ВГС, расходятся [16, 22].
    (check this in PDF content)

  3. Start
    5780
    Prefix
    Некоторые исследователи полагают, что присутствие вирусной РНК в мононуклеарных клетках объясняется пассивным включением вируса путем эндоцитоза [6] или контаминацией клеток циркулирующим вирусом
    Exact
    [15]
    Suffix
    . В настоящее время основным доказательством репликации является обнаружение репликативной, или минус-цепи РНК ВГС, однако экспериментальные данные, полученные относительно минус-РНК ВГС, расходятся [16, 22].
    (check this in PDF content)

  4. Start
    5991
    Prefix
    В настоящее время основным доказательством репликации является обнаружение репликативной, или минус-цепи РНК ВГС, однако экспериментальные данные, полученные относительно минус-РНК ВГС, расходятся
    Exact
    [16, 22]
    Suffix
    . Ключевым подходом в доказательстве вирусной репликации в клетках периферической крови может стать выявление вирусных белков, в особенности неструктурных (NS3, NS4, NS5), которые формируют репликативный комплекс и принимают непосредственное участие в репликации вируса.
    (check this in PDF content)

  5. Start
    7751
    Prefix
    Проведение ПБП осуществлялось после информированного согласия пациентов. Морфологические изменения в печени оценивали в баллах по модифицированной системе Metavir с определением гистологической активности (А) и степени фиброза (F)
    Exact
    [13]
    Suffix
    . Ни один из пациентов до исследования не получал специфическую антивирусную терапию. В качестве отрицательного контроля была исследована периферическая кровь от 20 анти-ВГС негативных добровольных доноров.
    (check this in PDF content)

  6. Start
    8771
    Prefix
    Иммуноцитохимическое окрашивание МКПК. Белки ВГС выявляли методом непрямого иммунопероксидазного окрашивания с использованием 17 оригинальных моноклональных антител (МКА) к 5 вирусным белкам, свойства которых описаны ранее
    Exact
    [1, 3, 5]
    Suffix
    . Использовали как отдельные антитела, так и смеси МКА к индивидуальным белкам (таблицы 1, 2). В качестве отрицательного контроля при исследовании образцов от каждого пациента применяли МКА к белку ВИЧ-1.
    (check this in PDF content)

  7. Start
    11189
    Prefix
    Положительными пробами считали те, в которых значения флуоресценции превышали таковые у нормальных доноров с учетом двух стандартных отклонений. Детекция и генотипирование РНК ВГС. Определение РНК ВГС в сыворотках пациентов проводили методом ОТ-ПЦР с использованием праймеров на 5'-НТР, согласно Okamoto et al.
    Exact
    [18]
    Suffix
    . Плюс- и минус-цепи РНК ВГС выявляли в лизатах МКПК 37 из 83 пациентов с ХГС с использованием праймеров, описанных ранее [14]. Генотипирование проводили по методу Ohno et al. [17]. Статистический анализ.
    (check this in PDF content)

  8. Start
    11317
    Prefix
    Определение РНК ВГС в сыворотках пациентов проводили методом ОТ-ПЦР с использованием праймеров на 5'-НТР, согласно Okamoto et al. [18]. Плюс- и минус-цепи РНК ВГС выявляли в лизатах МКПК 37 из 83 пациентов с ХГС с использованием праймеров, описанных ранее
    Exact
    [14]
    Suffix
    . Генотипирование проводили по методу Ohno et al. [17]. Статистический анализ. Для обработки данных использовали программу «Биостатистика» (версия 4.03). Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента, критерию Фишера или χ2, зависимость между признаками оценивалась по коэффициенту линейной регрессии.
    (check this in PDF content)

  9. Start
    11372
    Prefix
    Определение РНК ВГС в сыворотках пациентов проводили методом ОТ-ПЦР с использованием праймеров на 5'-НТР, согласно Okamoto et al. [18]. Плюс- и минус-цепи РНК ВГС выявляли в лизатах МКПК 37 из 83 пациентов с ХГС с использованием праймеров, описанных ранее [14]. Генотипирование проводили по методу Ohno et al.
    Exact
    [17]
    Suffix
    . Статистический анализ. Для обработки данных использовали программу «Биостатистика» (версия 4.03). Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента, критерию Фишера или χ2, зависимость между признаками оценивалась по коэффициенту линейной регрессии.
    (check this in PDF content)

  10. Start
    19393
    Prefix
    Обсуждение Полученные данные показали, что наиболее активно взаимодействовали с белками ВГС МКА 1с5, 1d11, 3f12, 2c9 (табл. 2). Следует отметить, что именно эти МКА были самыми эффективными при выявлении вирусных антигенов в ткани печени больных ХГС
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Это свидетельствует о том, что эпитопы, выявляемые данными МКА на неструктурных белках NS4 и NS5A, являются иммунодоминантными и заслуживают внимания при разработке вакцин. Важно отметить, что последовательности, опознаваемые указанными МКА, картированы [1, 5].
    (check this in PDF content)

  11. Start
    19661
    Prefix
    Это свидетельствует о том, что эпитопы, выявляемые данными МКА на неструктурных белках NS4 и NS5A, являются иммунодоминантными и заслуживают внимания при разработке вакцин. Важно отметить, что последовательности, опознаваемые указанными МКА, картированы
    Exact
    [1, 5]
    Suffix
    . Таблица 4. часТоТа выявления рнк вгс в сывороТке крови и мкПк больных хгс РНК ВГС в сыворотке Плюс-цепь РНК ВГС в МКПКМинус-цепь РНК ВГС в МКПК ОбнаруженаНе обнаруженаВсегоОбнаруженаНе обнаруженаВсего Обнаружена23124141024 Не обнаружена121135813 Всего35237191837 рисунок 1. частота выявления core-белка в мкПк пациентов с хгс в зависимости от гистологической активности и стадии гепатита Примеч
    (check this in PDF content)

  12. Start
    20905
    Prefix
    Показано, что в основном белки ВГС локализуются в моноцитарной фракции периферической крови. Данные исследователей о преимущественной локализации ВГС во фракциях клеток крови расходятся. Белки ВГС выявляют преимущественно в моноцитах
    Exact
    [11]
    Suffix
    , однако работы, посвященные детекции белков, единичны. Минус-цепи РНК ВГС одни исследователи обнаруживают исключительно в В- и Т-лимфоцитах [8], тогда как другие – одновременно в лимфоцитах, в моноцитах и гранулоцитах [10].
    (check this in PDF content)

  13. Start
    21057
    Prefix
    Белки ВГС выявляют преимущественно в моноцитах [11], однако работы, посвященные детекции белков, единичны. Минус-цепи РНК ВГС одни исследователи обнаруживают исключительно в В- и Т-лимфоцитах
    Exact
    [8]
    Suffix
    , тогда как другие – одновременно в лимфоцитах, в моноцитах и гранулоцитах [10]. Одной из основных задач настоящей работы было выяснение способности ВГС реплицироваться в МКПК. Данные опубликованных ранее работ значительно расходились: минус-цепи РНК ВГС либо не удавалось обнаружить в МКПК [4], либо они выявлялись у 70-80% больных ХГС [16].
    (check this in PDF content)

  14. Start
    21137
    Prefix
    Белки ВГС выявляют преимущественно в моноцитах [11], однако работы, посвященные детекции белков, единичны. Минус-цепи РНК ВГС одни исследователи обнаруживают исключительно в В- и Т-лимфоцитах [8], тогда как другие – одновременно в лимфоцитах, в моноцитах и гранулоцитах
    Exact
    [10]
    Suffix
    . Одной из основных задач настоящей работы было выяснение способности ВГС реплицироваться в МКПК. Данные опубликованных ранее работ значительно расходились: минус-цепи РНК ВГС либо не удавалось обнаружить в МКПК [4], либо они выявлялись у 70-80% больных ХГС [16].
    (check this in PDF content)

  15. Start
    21366
    Prefix
    Одной из основных задач настоящей работы было выяснение способности ВГС реплицироваться в МКПК. Данные опубликованных ранее работ значительно расходились: минус-цепи РНК ВГС либо не удавалось обнаружить в МКПК
    Exact
    [4]
    Suffix
    , либо они выявлялись у 70-80% больных ХГС [16]. Полученные нами результаты показали, что репликативная цепь РНК ВГС присутствовала у 51% пациентов, что согласуется с данными работ [12, 23]. Представляет интерес тот факт, что присутствие минус-цепей РНК ВГС в МКПК достоверно коррелировало с обнаружением белков core и NS5A.
    (check this in PDF content)

  16. Start
    21412
    Prefix
    Одной из основных задач настоящей работы было выяснение способности ВГС реплицироваться в МКПК. Данные опубликованных ранее работ значительно расходились: минус-цепи РНК ВГС либо не удавалось обнаружить в МКПК [4], либо они выявлялись у 70-80% больных ХГС
    Exact
    [16]
    Suffix
    . Полученные нами результаты показали, что репликативная цепь РНК ВГС присутствовала у 51% пациентов, что согласуется с данными работ [12, 23]. Представляет интерес тот факт, что присутствие минус-цепей РНК ВГС в МКПК достоверно коррелировало с обнаружением белков core и NS5A.
    (check this in PDF content)

  17. Start
    21555
    Prefix
    Данные опубликованных ранее работ значительно расходились: минус-цепи РНК ВГС либо не удавалось обнаружить в МКПК [4], либо они выявлялись у 70-80% больных ХГС [16]. Полученные нами результаты показали, что репликативная цепь РНК ВГС присутствовала у 51% пациентов, что согласуется с данными работ
    Exact
    [12, 23]
    Suffix
    . Представляет интерес тот факт, что присутствие минус-цепей РНК ВГС в МКПК достоверно коррелировало с обнаружением белков core и NS5A. Следует отметить, что у пациентов с ХГС накопление core-белка в печени также прямо коррелировало с выявлением репликативной формы РНК ВГС [2].
    (check this in PDF content)

  18. Start
    21840
    Prefix
    Представляет интерес тот факт, что присутствие минус-цепей РНК ВГС в МКПК достоверно коррелировало с обнаружением белков core и NS5A. Следует отметить, что у пациентов с ХГС накопление core-белка в печени также прямо коррелировало с выявлением репликативной формы РНК ВГС
    Exact
    [2]
    Suffix
    . Таким образом, этот белок может быть маркером активной репликации вируса. Не менее важна обнаруженная связь между наличием минус-РНК ВГС и экспрессией белка NS5A в МКПК. Этот белок наиболее часто обнаруживался нами в МКПК.
    (check this in PDF content)

  19. Start
    22185
    Prefix
    Не менее важна обнаруженная связь между наличием минус-РНК ВГС и экспрессией белка NS5A в МКПК. Этот белок наиболее часто обнаруживался нами в МКПК. Доказано, что этот неструктурный белок входит в состав репликативного комплекса и участвует в репликации ВГС
    Exact
    [7]
    Suffix
    . Таким образом, выявление в МКПК NS5A, как и других неструктурных белков, исключает пассивную адсорбцию вирионов из периферической крови и доказывает активную репликацию ВГС в этих клетках.
    (check this in PDF content)

  20. Start
    22712
    Prefix
    Репликация вируса гепатита С в МКПК может играть важную роль при хронизации заболевания и в механизмах ускользания от иммунного ответа хозяина. Размножение вируса в иммунокомпетентных клетках может приводить к нарушению их иммунологической функции, дисфункции иммунной системы и персистенции в печеночной ткани
    Exact
    [12]
    Suffix
    . Более ранние исследования, основанные на выявлении минус-РНК, не показали связи между репликацией ВГС в МКПК и активностью гепатита [20]. В данной работе в результате изучения белков ВГС удалось обнаружить влияние репликации ВГС в МКПК на клиническое течение и активность заболевания.
    (check this in PDF content)

  21. Start
    22861
    Prefix
    Размножение вируса в иммунокомпетентных клетках может приводить к нарушению их иммунологической функции, дисфункции иммунной системы и персистенции в печеночной ткани [12]. Более ранние исследования, основанные на выявлении минус-РНК, не показали связи между репликацией ВГС в МКПК и активностью гепатита
    Exact
    [20]
    Suffix
    . В данной работе в результате изучения белков ВГС удалось обнаружить влияние репликации ВГС в МКПК на клиническое течение и активность заболевания. Так, белки ВГС достоверно чаще обнаруживались в МКПК пациентов с повышенным уровнем АЛТ.
    (check this in PDF content)

  22. Start
    23536
    Prefix
    Белок NS4A, напротив, не обнаруживался в МКПК у больных с максимально тяжелыми гистологическими изменениями. Интересно, что этот белок также не выявлялся в клетках печени пациентов с терминальными стадиями ХГС
    Exact
    [2]
    Suffix
    . Впервые показана достоверная обратная корреляция между накоплением белков ВГС в МКПК и количеством мононуклеаров периферической крови в целом, и лимфоцитов, в частности. Возможно, обнаруженный дисбаланс в соотношении лимфоцитов и моноцитов объясняется накоплением белков ВГС в этих клетках.
    (check this in PDF content)

  23. Start
    24115
    Prefix
    Данные микроскопии позволили конкретизировать эти результаты и установить достоверную связь между выявлением белка NS4B и сокращением количества МКПК. Ранее было показано, что ВГС-инфекция МКПК может индуцировать Fas-зависимый апоптоз
    Exact
    [21]
    Suffix
    . Возможно, накопление белка NS4B играет важную роль в индукции апоптоза в лимфоцитах периферической крови. Полученные данные показывают, что в МКПК активно экспрессируются структурные и неструктурные белки ВГС, а также обнаруживаются геномные и репликативные цепи РНК ВГС.
    (check this in PDF content)