The 19 reference contexts in paper A. Korzhueva S., D. Ibragimova G., I. Ustinovich A., Artem Totolian A., M. Samoilovich P., A. Suvorov N., А. Коржуева С., Д. Ибрагимова Г., И. Устинович А., Артем Тотолян А., М. Самойлович П., А. Суворов Н. (2014) “ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ РАЗЛИЧНЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ФОРМ ИММУНОГЛОБУЛИНА КЛАССА А И РЕКОМБИНАНТНЫХ ДЕРИВАТОВ РЕЦЕПТОРНОГО ВАС БЕЛКА СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ В // INTERACTION BETWEEN DIFFERENT MOLECULAR FORMS OF IMMUNOGLOBULIN A AND RECOMBINANT DERIVATIVES POLYPEPTIDES OF BAC RECEPTOR PROTEINS FROM GROUP B STREPTOCOCCI” / spz:neicon:mimmun:y:2008:i:5:p:327-336

  1. Start
    4055
    Prefix
    Immunol., vol. 10, N 4-5, pp 327-336) Введение Сведения о бактериальных белках, неиммунно реагирующих с иммуноглобулинами, впервые были описаны в 1966 году на примере белка А Staphylococcus aureus
    Exact
    [12]
    Suffix
    . Изучение микробных иммуноглобулин-рецепторных молекул и их участия в патогенезе заболеваний позволяет разрабатывать новые, более совершенные, способы лечения, профилактики и диагностики патологии.
    (check this in PDF content)

  2. Start
    6076
    Prefix
    из основных возбудителей тяжелых заболеваний человека (патология беременности, сепсис и менингит у новорожденных и детей раннего возраста, остеомиелит, артрит; у взрослых – эндокардит, пиелонефрит, мастит, септицемия, артрит, некротический фасцит, офтальмит и др.), что при недостаточной эффективности мер профилактики создает напряженную эпидемиологическую ситуацию во многих странах
    Exact
    [8, 14]
    Suffix
    . СГВ экспрессируют на своей поверхности большое число иммуногенных протеинов. Этот факт оправдывает использование иммуногенных свойств бактериальных молекул для создания средств профилактики заболеваний стрептококковой этиологии путем включения поверхностных белков и их дериватов в состав вакцинных препаратов против СГВ.
    (check this in PDF content)

  3. Start
    6983
    Prefix
    По мнению некоторых исследователей, IgA-связывающий сайт Вас белка включает область из 6 аминокислот MLKKIE, ответственную за проявление поверхностным белком способности связывать IgA
    Exact
    [13]
    Suffix
    . При создании полипептида Р7 в области потенциальной антигенной детерминанты была проведена замена двух аминокислот (лизин в положении 225 замещен на аргинин, а глутамат в положении 227 – на глутамин), что привело к изменению этой области на MLKRIQ (табл. 1).
    (check this in PDF content)

  4. Start
    7917
    Prefix
    Молекулярная масса, kDa Р6406-1287MLKKIE29434 Р7301-1653MLKRIQ45152 Р8301-1653MLKKIE45152 примечание. * – последовательности указаны в Protein One-letter code. позволила предположить различия их свойств, некоторые из которых рассмотрены ниже. Ранее была показана иммуногенность и протективность полипептида Р6, что позволило рассматривать его в качестве потенциального компонента вакцины
    Exact
    [5, 7]
    Suffix
    . В настоящей работе проанализирована способность всех трех полипептидов Р6, Р7, Р8 взаимодействовать с различными молекулярными формами IgA, изучена зависимость IgA-связывающих свойств от структуры полипептида-рецептора, а также определены некоторые аспекты неиммунного взаимодействия дериватов с молекулой IgA, что позволило расширить спектр применения рекомбинантных произво
    (check this in PDF content)

  5. Start
    8933
    Prefix
    белка Вас СГВ путем амплификации в ПЦР фрагментов хромосомной ДНК штамма 219/4849 Ibc серотипа и их последовательного клонирования в плазмидном векторе pGEM-T Easy («Promega», СШA), а затем в системе экспрессионных векторов pQE-30/31/32 (The QIAexpress System, Qiagen, США) в культуре E. coli JM 109. Выделение и очистка дериватов Вас белка осуществлена по методикам, описанным ранее
    Exact
    [6]
    Suffix
    . ИФА. Все эксперименты проведены при условиях, близких к равновесным. Во всех опытах для ИФА (прямого, непрямого, ингибиторного, конкурентного варианта ингибирования) использовали планшеты NUNC MaxiSorb («Danemark») с высокой сорбционной активностью.
    (check this in PDF content)

  6. Start
    9549
    Prefix
    Препараты для различных вариантов ИФА, приготовленные и охарактеризованные ранее, были любезно предоставлены сотрудниками Лаборатории гибридомной технологии ФГУ «РНЦРХТ Росмедтехнологий»
    Exact
    [1, 2, 4]
    Suffix
    . Иммуноглобулины, непосредственно взаимодействующие с антигеном [1]. 1) Меченые пероксидазой хрена моноклональные IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и меченый сывороточный IgG (препарат, содержащий все подклассы IgG в пропорциях, характерных для сыворотки крови). 2) Поликлональный сывороточный IgA (mIgA), меченный пероксидазой хрена (конъюгат). 3) Поликлональный mIgA (66% IgA и 27% IgM), выде
    (check this in PDF content)

  7. Start
    9623
    Prefix
    Препараты для различных вариантов ИФА, приготовленные и охарактеризованные ранее, были любезно предоставлены сотрудниками Лаборатории гибридомной технологии ФГУ «РНЦРХТ Росмедтехнологий» [1, 2, 4]. Иммуноглобулины, непосредственно взаимодействующие с антигеном
    Exact
    [1]
    Suffix
    . 1) Меченые пероксидазой хрена моноклональные IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и меченый сывороточный IgG (препарат, содержащий все подклассы IgG в пропорциях, характерных для сыворотки крови). 2) Поликлональный сывороточный IgA (mIgA), меченный пероксидазой хрена (конъюгат). 3) Поликлональный mIgA (66% IgA и 27% IgM), выделенный методом колоночной хроматографии и осажденный сульфатом амм
    (check this in PDF content)

  8. Start
    10766
    Prefix
    , содержание IgA1 и IgA2 в естественных для организма человека пропорциях. 6) Коллекция из 14 цельных индивидуальных миеломных сывороток пациентов (12 образцов IgA1, 2 образца IgA2). 7) Пулированная сыворотка 200 здоровых доноров (8,8 мг/мл IgG, 1,6 мг/мл IgA). Выявляющие молекулы. 1) Моноклональные антитела (МкАт) для выявления IgG, меченные пероксидазой хрена (обозначенные как 3D3)
    Exact
    [4]
    Suffix
    . 2) Конъюгат МкАт с пероксидазой хрена против κ-легких цепей и конъюгат МкАт с пероксидазой хрена против λ-цепей (выявляющие молекулы против κ- и λ-цепей получали смешиванием указанных конъюгатов) [2]. 3) Панель из 9 МкАт, 8 из которых направлены к детерминантам, экспрессированным исключительно на иммуноглобулинах класса А, а одно МкАт (2В5) – к эпитопу, характерному только для IgA1. 4
    (check this in PDF content)

  9. Start
    10970
    Prefix
    Выявляющие молекулы. 1) Моноклональные антитела (МкАт) для выявления IgG, меченные пероксидазой хрена (обозначенные как 3D3) [4]. 2) Конъюгат МкАт с пероксидазой хрена против κ-легких цепей и конъюгат МкАт с пероксидазой хрена против λ-цепей (выявляющие молекулы против κ- и λ-цепей получали смешиванием указанных конъюгатов)
    Exact
    [2]
    Suffix
    . 3) Панель из 9 МкАт, 8 из которых направлены к детерминантам, экспрессированным исключительно на иммуноглобулинах класса А, а одно МкАт (2В5) – к эпитопу, характерному только для IgA1. 4) Афинно очищенные поликлональные антитела кролика против иммуноглобулинов мыши, меченные пероксидазой хрена (RαM*PОx).
    (check this in PDF content)

  10. Start
    13540
    Prefix
    Далее смесь добавляли к адсорбированным полипептидам и инкубировали в течение 2,5 часов при комнатной температуре (около 22°C). Нативный электрофорез в агарозном геле проводили как это изложено в
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Восстановление дисульфидных связей в молекуле IgA. Чигаин и поликлональный mIgA подвергались обработке 0,01М ДТТ в 0,4М Tris-HCl, рН8,3 при 24°С в течение 2,5 часов с последующим алкилированием образующихся SH-групп 0,022 М йодоацетамидом при 0°С в течение 30 минут.
    (check this in PDF content)

  11. Start
    23968
    Prefix
    Тем не менее, как показывает практика создания рекомбинантных пептидов и полипептидов на основе полноразмерного белка Вас, дифференциация производных по длине, сохранности и положению области MLKKIE относительно C-конца значительно влияет на их свойства
    Exact
    [5]
    Suffix
    . Настоящее исследование посвящено анализу особенностей и структурных аспектов взаимодействия IgA с полипептидами Р6, Р7, Р8. Как указано ранее, два производных (Р6, Р8) Вас белка содержат последовательность из шести аминокислот MLKKIE, роль которой не ясна: создает ли гексапептид оптимальную конфигурацию для взаимодействия или непосредственно участвует в связывании Fc-области IgA.
    (check this in PDF content)

  12. Start
    24811
    Prefix
    , однако установлено, что полипептид Р7 (содержит измененную последовательность MLKRIQ) обладает существенно более слабой способностью к связыванию всех рассмотренных молекулярных форм IgA. Ранее были получены данные, свидетельствующие об отсутствии изменения IgAрецепторной активности рекомбинантного 20 kDa пептида, в MLKKIE-последовательности которого замещены две аминокислоты
    Exact
    [11]
    Suffix
    . Результаты настоящей работы свидетельствуют о сильном изменении иммуноглобулин-связывающих свойств полипептида, полностью идентичного рекомбинантному протеину Р8 за исключением двух аминокислотных замен, что подтверждает важное значение гексапептида MLKKIE в реализации IgA-рецепторной активности белками.
    (check this in PDF content)

  13. Start
    25263
    Prefix
    изменении иммуноглобулин-связывающих свойств полипептида, полностью идентичного рекомбинантному протеину Р8 за исключением двух аминокислотных замен, что подтверждает важное значение гексапептида MLKKIE в реализации IgA-рецепторной активности белками. Вас белок имеет несколько антигенных детерминант, в том числе и в N-терминальной области, что показано рядом авторов
    Exact
    [5, 16]
    Suffix
    . Повидимому, полипептид Р7, созданный на основе N-терминальной области белка Вас, можно рассматривать как наиболее приемлемый кандидат в состав вакцины из-за низкого уровня связывания IgA и наличия антигенных свойств.
    (check this in PDF content)

  14. Start
    25922
    Prefix
    В ранее опубликованных работах указано на зависимость IgA-рецепторных свойств от длины рекомбинантного протеина – с увеличением количества аминокислот в последовательности возрастает успешность взаимодействия с лигандом
    Exact
    [5]
    Suffix
    . В данном исследовании показано, что полипептид Р6, несмотря на меньший размер, обладает преимуществом перед Р8 в связывании IgA. Это можно объяснить отсутствием у Р8 оптимальной конформации или стерическими затруднениями, вызванными взаимодействием с IgA молекулы большого размера.
    (check this in PDF content)

  15. Start
    26995
    Prefix
    , если распрострарисунок 5. влияние восстановления дисульфидных связей сывороточного IgA на взаимодействие с рекомбинантными полипептидами р6 и р8 примечания: по оси абсцисс – полипептиды Р6, Р8; по оси ординат – ингибирование, %. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 P6P8 восстановленный IgAнативный IgA нить свойства белка Вас с IgA-рецепторной способностью на его рекомбинантные дериваты
    Exact
    [15, 17]
    Suffix
    . Была проанализирована способность Р6, Р7, Р8 взаимодействовать с mIgA и SIgA. По данным ряда исследователей, Вас белок обладает слабо выраженной способностью к связыванию SIgA, существование взаимодействия с которым необходимо для реализации биологических функций СГВ [10].
    (check this in PDF content)

  16. Start
    27283
    Prefix
    По данным ряда исследователей, Вас белок обладает слабо выраженной способностью к связыванию SIgA, существование взаимодействия с которым необходимо для реализации биологических функций СГВ
    Exact
    [10]
    Suffix
    . В условиях равенства концентраций лиганда (по массе) продемонстрировано, что уровень связывания полипептидами Р6, Р7, Р8 сывороточного парапротеина выше, чем секреторного. Установлена способность полипептидов Р6 и Р8 вступать во взаимодействие с IgA как в растворе, так и в адсорбированном состоянии.
    (check this in PDF content)

  17. Start
    27716
    Prefix
    Установлена способность полипептидов Р6 и Р8 вступать во взаимодействие с IgA как в растворе, так и в адсорбированном состоянии. Это справедливо и для Вас белка, свойства которого в связанном состоянии отличны от таковых в растворе
    Exact
    [9]
    Suffix
    . Также исследовано различие в связывании полипептидами Р6, Р7, Р8 двух подклассов IgA1 и IgA2. Оказалось, что количество связавшегося IgA1 c любым из полипептидов выше, чем IgA2, что вероятно связано с особенностями конфигурации IgA2.
    (check this in PDF content)

  18. Start
    28076
    Prefix
    Оказалось, что количество связавшегося IgA1 c любым из полипептидов выше, чем IgA2, что вероятно связано с особенностями конфигурации IgA2. Ранее эта особенность была выявлена для полноразмерного белка Вас, преимущественно связывающего первый подкласс IgA
    Exact
    [15]
    Suffix
    . Интересным представлялось дополнить информацию о взаимодействии IgА с дериватами Вас белка данными о положении сайта связывания полипептидов Р6, Р7, Р8, его консервативности и устойчивости.
    (check this in PDF content)

  19. Start
    32940
    Prefix
    , 1B12), участки связывания которых на IgA топографически приближены к сайту связывания производных Вас белка (Р6, Р7, Р8), могут быть использованы для анализа взаимоотношений Fc-рецепторов стрептококков и человека. Это связано с тем, что сайт связывания рецептора человека FcαRI перекрывается с сайтом связывания белка Вас, причем Вас белок ингибирует функции указанного рецептора
    Exact
    [18]
    Suffix
    . Таким образом, охарактеризованы IgAрецепторные свойства рекомбинантных дериватов белка Вас. Полипептиды Р6, Р7, Р8 селективно связывают mIgA и SIgA, а также оба подкласса сывороточного IgA1 и IgA2.
    (check this in PDF content)