The 23 reference contexts in paper T. Bobrova S., Yu. Chuev V., Т. Боброва С., Ю. Чуев В. (2014) “ЭКСПРЕССИЯ ОПУХОЛЕ-АССОЦИИРОВАННЫХ БЕЛКОВ В ТКАНЯХ И В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ПОЧКИ // EXPRESSION OF CANCER-ASSOCIATED PROTEINS IN TISSUES AND BLOOD SERUM FROM PATIENTS WITH RENAL CELL CARCINOMA” / spz:neicon:mimmun:y:2008:i:3:p:209-214

  1. Start
    4391
    Prefix
    В России за 2003 год выявлено 15 тыс. больных, их доля среди всех злокачественных новообразований составила 3,9% у мужчин и 2,7% у женщин. Среди случайно выявленных опухолей 85% составляют локализованные формы, тогда как при наличии клинических симптомов ограниченными капсулой почки оказываются только 40-45% новообразований
    Exact
    [5, 6]
    Suffix
    . В настоящее время принято выделять несколько разновидностей почечно-клеточных карцином (ПКК). Наиболее часто (в 70-80% ПКК) наблюдается светло-клеточный (не папиллярный) тип опухоли (clear-cell RCC).
    (check this in PDF content)

  2. Start
    4873
    Prefix
    Другой типичной разновидностью ПКК (10-15% случаев) являются папиллярные карциномы почек, отличающиеся благополучным течением. На сегодняшний день не существует специфических и высокочувствительных маркеров, позволяющих диагностировать эту патологию
    Exact
    [5, 6]
    Suffix
    . Целью настоящей работы является исследование распределения опухолеассоциированных белков в образцах тканей рака почки, рака мочевого пузыря и в ультраосадках сывороток крови онкологических больных при помощи МКА и моноспецифических антисывороток (Ас) методом иммуноблоттинга (ИБ) и оценки возможности использования полученных данных для диагностики.
    (check this in PDF content)

  3. Start
    7294
    Prefix
    Для получения лизатов опухолевые клетки, клетки метастазов и нормальные ткани обрабатывали с использованием буфера, содержащего 100 ммоль/л NaCl, 0,1% SDS, 10 ммоль/л трис-HCl (pH 7,5), 1 ммоль/л ЭДТА, 0,5% тритон, 1 ммоль/л PMSF, 0,02% азида натрия. Лизаты центрифугировали при 10 000 g в течение 10 мин
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Сыворотки крови онкологических больных. С целью поиска мембранных белков сыворотки крови подвергали ультрацентрифугированию при 125 000 g в течение одного часа. Осадок растворяли в буфере для нанесения образцов с 2% 2-β-меркапэтанолом (2-МЕ) и подвергали электрофорезу в 8% ПААГ по U.
    (check this in PDF content)

  4. Start
    7619
    Prefix
    С целью поиска мембранных белков сыворотки крови подвергали ультрацентрифугированию при 125 000 g в течение одного часа. Осадок растворяли в буфере для нанесения образцов с 2% 2-β-меркапэтанолом (2-МЕ) и подвергали электрофорезу в 8% ПААГ по U.K. Laemmli
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Моноклональные антитела. МКА 1 и МКА 2Н6 (мышиные, IgG1 против 3M KCl экстракта клеток НЕр-2) получены по стандартной методике [1, 2]. Иммуноглобулиновые фракции, выделенные из асцитной жидкости, очищали с помощью ионообменной хроматографии и использовали в дальнейшей работе [1, 2].
    (check this in PDF content)

  5. Start
    7758
    Prefix
    Осадок растворяли в буфере для нанесения образцов с 2% 2-β-меркапэтанолом (2-МЕ) и подвергали электрофорезу в 8% ПААГ по U.K. Laemmli [1, 2]. Моноклональные антитела. МКА 1 и МКА 2Н6 (мышиные, IgG1 против 3M KCl экстракта клеток НЕр-2) получены по стандартной методике
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Иммуноглобулиновые фракции, выделенные из асцитной жидкости, очищали с помощью ионообменной хроматографии и использовали в дальнейшей работе [1, 2]. Антисыворотки (Ас). Ас р34, р50 получены к отдельным белкам клеток НЕр-2, перенесенным на нитроцеллюлозу после полупрепаративного электрофореза.
    (check this in PDF content)

  6. Start
    7910
    Prefix
    МКА 1 и МКА 2Н6 (мышиные, IgG1 против 3M KCl экстракта клеток НЕр-2) получены по стандартной методике [1, 2]. Иммуноглобулиновые фракции, выделенные из асцитной жидкости, очищали с помощью ионообменной хроматографии и использовали в дальнейшей работе
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Антисыворотки (Ас). Ас р34, р50 получены к отдельным белкам клеток НЕр-2, перенесенным на нитроцеллюлозу после полупрепаративного электрофореза. Полосы нитроцеллюлозы, соответствующие мол. массе (м.м.) 34 и 50 kDa, вырезали, растворяли в100 мкл диметилсульфоксида и вводили в подколенные лимфоузлы кролику трехкратно с интервалами в один месяц.
    (check this in PDF content)

  7. Start
    9308
    Prefix
    Выявление реакции МКА с белками и в образцах тканей, и сыворотках крови больных и здоровых доноров проведено с использованием вторых биотинилированных антител или по методике ECL+ в соответствии с протоколом Amersham Pharmacia Bioteck (Швеция)
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Статистическая обработка. Сравнение значений проводили между данными по выявлению р34-38 в опухолевых и условно нормальных тканях по t-критерию Стьюдента [3]. Различия считали статистически достоверными при р < 0,05.
    (check this in PDF content)

  8. Start
    9473
    Prefix
    и в образцах тканей, и сыворотках крови больных и здоровых доноров проведено с использованием вторых биотинилированных антител или по методике ECL+ в соответствии с протоколом Amersham Pharmacia Bioteck (Швеция) [1, 2]. Статистическая обработка. Сравнение значений проводили между данными по выявлению р34-38 в опухолевых и условно нормальных тканях по t-критерию Стьюдента
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Различия считали статистически достоверными при р < 0,05. Результаты Выявление р34-38, р28-29 в образцах опухолевых и условно нормальных тканей почки с помощью МКА 1 Ранее нами были получены моноклональные антитела (МКА 1, мышиные, клон 1F3-2D4, класса IgG1) к белкам перевиваемой клеточной линии НЕр-2 [1, 2].
    (check this in PDF content)

  9. Start
    9790
    Prefix
    Результаты Выявление р34-38, р28-29 в образцах опухолевых и условно нормальных тканей почки с помощью МКА 1 Ранее нами были получены моноклональные антитела (МКА 1, мышиные, клон 1F3-2D4, класса IgG1) к белкам перевиваемой клеточной линии НЕр-2
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . Методом ИБ было обнаружено, что МКА 1 выявляют семейство белков – р25-28, р32, р34-38, р55-65, р72-75, р135-155, р170-250, главными из которых по частоте и интенсивности выявления являются белки р34-38 и р55.
    (check this in PDF content)

  10. Start
    10313
    Prefix
    Позитивная реакция была обнаружена в образцах других опухолевых тканей, но в меньшем проценте случаев. Экспрессия р34-38 была выявлена также при помощи МКА 1 в ~ 50% случаев в опухолевых тканях почки
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    . С помощью МКА 1 исследовано 34 образца опухолевых и 27 образцов нормальных тканей почки (табл. 1). Положительная реакция р34-38 выявлена в 13 случаях (38%) ПКК, при этом отмечена интенсивная реакция, в то время как в прилежащих тканях положительная реакция выявлена в 8 случаях (30%) и выявлена лишь умеренная реакция (рис. 1).
    (check this in PDF content)

  11. Start
    16168
    Prefix
    Обсуждение Считается, что ПКК представляет собой уникальную модель для изучения естественного развития опухолевой гетерогенности. Одна из наиболее распространенных гипотез объясняет эту гетерогенность генетической нестабильностью опухолевых клеток, часто проявляющуюся в повторных мутационных изменениях
    Exact
    [5, 6]
    Suffix
    . p53 и Bcl-2 являются двумя ключевыми генами, вовлеченными в регуляцию клеточного цикла и клеточной гибели. Измененная экспрессия и мутация этих генов обнаруживается у больных раком рисунок 1.
    (check this in PDF content)

  12. Start
    18050
    Prefix
    Показано, что экспрессия р53 коррелировала с недостатком экспрессии Bcl-2 белка, анэуплоидностью и высоким пролиферативным индексом, в то время как экспрессия Bcl-2 ассоциируется с нормальным содержанием ДНК и низким пролиферативным индексом
    Exact
    [7, 10, 15]
    Suffix
    . Таким образом, на основании сходства м.м. и частого выявления другими авторами р53 и белков Bcl-2 в клетках тканей ПКК [5, 10], можно было бы предположить, что выявленные нами белки имеют к ним отношение.
    (check this in PDF content)

  13. Start
    18183
    Prefix
    Показано, что экспрессия р53 коррелировала с недостатком экспрессии Bcl-2 белка, анэуплоидностью и высоким пролиферативным индексом, в то время как экспрессия Bcl-2 ассоциируется с нормальным содержанием ДНК и низким пролиферативным индексом [7, 10, 15]. Таким образом, на основании сходства м.м. и частого выявления другими авторами р53 и белков Bcl-2 в клетках тканей ПКК
    Exact
    [5, 10]
    Suffix
    , можно было бы предположить, что выявленные нами белки имеют к ним отношение. Однако р28-29, выявленные нами, скорее всего не являются Bcl-2 белками, поскольку обнаружена лишь слабая реакция в одном из 27 образцов тканей, прилежащих к опухоли почки. р28-29, возможно, является продуктом посттрансляционных модификаций р34-38. р21-24 также, возможно, является продуктом
    (check this in PDF content)

  14. Start
    18918
    Prefix
    модификаций р34-38. р21-24 также, возможно, является продуктом посттрансляционных модификаций р34-38, но в опухолевой ткани почки этот процесс, возможно, идет до белков с м.м. 28-29 kDa, в прилежащих тканях – до 21-24 kDa. По м.м., источникам получения и способам частичной очистки (преципитация белков из лизатов клеток НЕр-2 50-60% или 70% раствором сульфата аммония
    Exact
    [1, 2]
    Suffix
    р34-38 похожи и на белки человеческих факторов сплайсинга – SF2/ASF (р32, 33, р55), SC35 (p34, p35) [10, 13]. Возможно, р34-38 так же, как и белки факторов сплайсинга, имеют истинную м.м. – 28-29 kDa без посттрансляционных модификаций.
    (check this in PDF content)

  15. Start
    19029
    Prefix
    По м.м., источникам получения и способам частичной очистки (преципитация белков из лизатов клеток НЕр-2 50-60% или 70% раствором сульфата аммония [1, 2] р34-38 похожи и на белки человеческих факторов сплайсинга – SF2/ASF (р32, 33, р55), SC35 (p34, p35)
    Exact
    [10, 13]
    Suffix
    . Возможно, р34-38 так же, как и белки факторов сплайсинга, имеют истинную м.м. – 28-29 kDa без посттрансляционных модификаций. Однако МКА 1 и МКА 2Н6 не выявили высокомолекулярных белков в образцах тканей ПКК, прилежащих тканях и тканях с другой локализацией опухоли.
    (check this in PDF content)

  16. Start
    19428
    Prefix
    Однако МКА 1 и МКА 2Н6 не выявили высокомолекулярных белков в образцах тканей ПКК, прилежащих тканях и тканях с другой локализацией опухоли. А для белков альтернативного фактора сплайсинга показана ассоциация с клеточной РНК
    Exact
    [10]
    Suffix
    . Когда мы взяли в качестве контроля некоторые антисыворотки, полученные к отдельным белкам НЕр-2 клеток, то на тех же 17 образцах тканей мы выявили положительную реакцию антисывороток с высокомолекулярными белками.
    (check this in PDF content)

  17. Start
    20360
    Prefix
    Показано, что во многих клетках расщеплению ДНК предшествует пермеабилизация наружной мембраны и предполагается, что межнуклеосомная фрагментация ДНК является первой необратимой стадией апоптоза
    Exact
    [7]
    Suffix
    . Возможно, высокомолекулярные фрагменты, выявленные Ас и частично МКА, – это фрагменты ДНК или/и РНК, которые ассоциированы с какими-то из выявленных нами белков. Предполагают, что в клетках присутствуют два класса белков, участвующих в апоптозе: первый необходим для нормального протекания процесса, в то время как второй ингибирует апоптоз [7].
    (check this in PDF content)

  18. Start
    20719
    Prefix
    Возможно, высокомолекулярные фрагменты, выявленные Ас и частично МКА, – это фрагменты ДНК или/и РНК, которые ассоциированы с какими-то из выявленных нами белков. Предполагают, что в клетках присутствуют два класса белков, участвующих в апоптозе: первый необходим для нормального протекания процесса, в то время как второй ингибирует апоптоз
    Exact
    [7]
    Suffix
    . Среди систем защиты клетки от апоптоза выделяется шаперонный механизм, основанный на белке теплового шока с м.м. 70 kDa – Hsp70 [8, 12]. Выявленные нами белки могут быть Hsp 70-р53 комплексом, который, как считают, формируется при мутациях р53.
    (check this in PDF content)

  19. Start
    20854
    Prefix
    Предполагают, что в клетках присутствуют два класса белков, участвующих в апоптозе: первый необходим для нормального протекания процесса, в то время как второй ингибирует апоптоз [7]. Среди систем защиты клетки от апоптоза выделяется шаперонный механизм, основанный на белке теплового шока с м.м. 70 kDa – Hsp70
    Exact
    [8, 12]
    Suffix
    . Выявленные нами белки могут быть Hsp 70-р53 комплексом, который, как считают, формируется при мутациях р53. Возможно, МКА 1 выявляют белки факторов альтернативного сплайсинга [(р32-34, р35, р55), (р23, р28 – посттрансляционная модификация предыдущих белков)], но белки альтернативного сплайсинга являются гомологами белков Hsp70, и к тому же показано, что Hsp70 может образовывать
    (check this in PDF content)

  20. Start
    21586
    Prefix
    Таким образом, получается, что МКА 1 могут выявлять комплекс(ы) белков – р21-24-р28-29-р3438-р53-р55-р63-р73/Hsp70. Возможно, эти комплексы, выявленные нами, являются проявлением своего рода защиты организма от чужеродных воздействий (мутаций, вирусов, радиации, химических веществ)
    Exact
    [7]
    Suffix
    . Неизвестна их функциональная и прогностическая роль – являются ли они предвестником ухудшения состояния здоровья больного или свидетельствуют о стабилизации опухолевого процесса; на каких стадиях болезни они появляются; как часто выявляются они у здоровых доноров и больных с терапевтическими заболеваниями.
    (check this in PDF content)

  21. Start
    22155
    Prefix
    Клеточные белковые компоненты способны формировать комплексы. Так, регуляторный фактор Х является мультимерным фосфопротеиновым комплексом. Комплексы способны формировать snRNP и src-подобные протеинтирозин киназы р53/56 lyn
    Exact
    [10, 11, 14, 17]
    Suffix
    . Помимо Hsp-70, который может образовывать стабильные комплексы с другими белками, показано, что весь опухолевый Hsp-90 находится в мультишаперонных комплексах с высокой АТФазной активностью, в то время как Hsp-90 из нормальной ткани находится в латентном состоянии вне комплексов [8, 12].
    (check this in PDF content)

  22. Start
    22470
    Prefix
    Помимо Hsp-70, который может образовывать стабильные комплексы с другими белками, показано, что весь опухолевый Hsp-90 находится в мультишаперонных комплексах с высокой АТФазной активностью, в то время как Hsp-90 из нормальной ткани находится в латентном состоянии вне комплексов
    Exact
    [8, 12]
    Suffix
    . Фактор 3 инициации трансляции млекопитающих (eIF3) является мультипротеиновым комплексом с м.м. 600 kDa [9]. кДНК кодирует 5 из 10 субъединиц, названных eIF3 – p170, p116, p110, p48 и p35.
    (check this in PDF content)

  23. Start
    22594
    Prefix
    может образовывать стабильные комплексы с другими белками, показано, что весь опухолевый Hsp-90 находится в мультишаперонных комплексах с высокой АТФазной активностью, в то время как Hsp-90 из нормальной ткани находится в латентном состоянии вне комплексов [8, 12]. Фактор 3 инициации трансляции млекопитающих (eIF3) является мультипротеиновым комплексом с м.м. 600 kDa
    Exact
    [9]
    Suffix
    . кДНК кодирует 5 из 10 субъединиц, названных eIF3 – p170, p116, p110, p48 и p35. Охарактеризована кДНК, кодирующая главную РНК-связывающую субъединицу – eIF3 – p66 и две дополнительных eIF3 – р47 и р40.
    (check this in PDF content)