The 39 reference contexts in paper Ekaterina Vasilevskaya R.., Elena Kotenkova A., Ekaterina Lukinova A., Evgenia Kalinova A., Екатерина Василевская Романовна, Елена Котенкова Александровна, Екатерина Лукинова Александровна, Евгения Калинова Андреевна (2017) “МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВО-ПЕПТИДНЫХ КОМПОНЕНТОВ ЭКСТРАКТОВ ТКАНЕЙ SUS SCROFA // RESEARCH METHODOLOGY OF SUS SCROFA TISSUE EXTRACTS PROTEIN-PEPTIDE COMPONENTS” / spz:neicon:meat:y:2017:i:3:p:79-85

  1. Start
    4087
    Prefix
    Критическим моментом является правильный выбор метода определения содержания белка и его модификаций, поскольку в зависимости от природы образца, можно получить либо завышенные, либо заниженные результаты
    Exact
    [1]
    Suffix
    . Одним из самых важных требований, которые предъявляются к методу определения концентрации белка, является его инертность к присутствию посторонних внутриклеточных компонентов и к составу экстрагирующей смеси.
    (check this in PDF content)

  2. Start
    4981
    Prefix
    Critical moment is aright choice of protein content determination method and its modifications as overestimated or underestimated results can be obtained depending on a sample nature
    Exact
    [1]
    Suffix
    . One oft he most important requirements to a method for protein concentration detection is its inertness to foreign intracellular components presence and to extraction mixture composition.
    (check this in PDF content)

  3. Start
    5605
    Prefix
    At present, there are no methods for quantitative protein deOriginal scientific paper торый обладал бы в равной степени специфичностью, чувствительностью, воспроизводимостью, быстротой и простотой проведения, а также отсутствием влияния небелковых компонентов. У каждого метода определения содержания белка есть свои преимущества и недостатки
    Exact
    [2]
    Suffix
    . Наиболее популярными и достоверными методами, используемыми в современной практике, являются: спектрофотометрическое определение концентрации белка, метод Кингслея — Вейксельбаума, метод Лоури и метод Брэдфорда [3].
    (check this in PDF content)

  4. Start
    5839
    Prefix
    Наиболее популярными и достоверными методами, используемыми в современной практике, являются: спектрофотометрическое определение концентрации белка, метод Кингслея — Вейксельбаума, метод Лоури и метод Брэдфорда
    Exact
    [3]
    Suffix
    . Спектрофотометрический метод основан на поглощении ультрафиолетового излучения ароматическими аминокислотами (тирозина, триптофана, и фенилаланина), входящими в последовательность белковой молекулы.
    (check this in PDF content)

  5. Start
    6279
    Prefix
    Содержание белка находят по формуле Калькара, которая дает возможность исключить влияние нуклеиновых кислот в образцах, на основе данных определения оптической плотности при 280 и 260 нм
    Exact
    [4]
    Suffix
    . Метод Кингслея — Вейксельбаума впервые был описан в 1914 году, основан на биуретовой реакции и является колориметрическим. Принцип метода состоит в образовании филотевого комплекса ионов меди с белковыми молекулами в щелочной среде: связывание атома кислорода с ионом меди происходит за счет появления отрицательного заряда, возникающего при отщеплении атома водород
    (check this in PDF content)

  6. Start
    6715
    Prefix
    Принцип метода состоит в образовании филотевого комплекса ионов меди с белковыми молекулами в щелочной среде: связывание атома кислорода с ионом меди происходит за счет появления отрицательного заряда, возникающего при отщеплении атома водорода от енольной группы пептидной связи
    Exact
    [5]
    Suffix
    . В биуретовую реакцию вступают белки и пептиды, состоящие не менее чем из 3 аминокислот. Концентрацию белка устанавливают по интенсивности светопоглощения при длине волны 540– 580 нм. Предел чувствительности биуретового метода ограничен концентрацией белка 300 мг/л [6].
    (check this in PDF content)

  7. Start
    6995
    Prefix
    В биуретовую реакцию вступают белки и пептиды, состоящие не менее чем из 3 аминокислот. Концентрацию белка устанавливают по интенсивности светопоглощения при длине волны 540– 580 нм. Предел чувствительности биуретового метода ограничен концентрацией белка 300 мг/л
    Exact
    [6]
    Suffix
    . Метод Лоури основан на реакции с реагентом Фолина — Чокалтеу, активным компонентом которого является комплекс из молибдата, вольфрамата и фосфорной кислоты. В ходе биуретовой реакции и восстановления реактива Фолина циклическими аминокислотами [7](главным образом тирозином, а также триптофаном и фенилаланином, в меньшей степени — цистеином), происходит окрашивани
    (check this in PDF content)

  8. Start
    7267
    Prefix
    Метод Лоури основан на реакции с реагентом Фолина — Чокалтеу, активным компонентом которого является комплекс из молибдата, вольфрамата и фосфорной кислоты. В ходе биуретовой реакции и восстановления реактива Фолина циклическими аминокислотами
    Exact
    [7]
    Suffix
    (главным образом тирозином, а также триптофаном и фенилаланином, в меньшей степени — цистеином), происходит окрашивание раствора. Метод Лоури более чем в сто раз чувствительнее биуретового, однако является невысокоспецифичным, физиологически активные амины мешают точному определению концентрации белка [8].
    (check this in PDF content)

  9. Start
    7603
    Prefix
    реактива Фолина циклическими аминокислотами [7](главным образом тирозином, а также триптофаном и фенилаланином, в меньшей степени — цистеином), происходит окрашивание раствора. Метод Лоури более чем в сто раз чувствительнее биуретового, однако является невысокоспецифичным, физиологически активные амины мешают точному определению концентрации белка
    Exact
    [8]
    Suffix
    . Метод Брэдфорда с применением красителя Кумасси бриллиантового синего (КБС) G-250 является достаточно чувствительным и простым. Предположительно, молекула красителя образует мостик между двумя отрицательно заряженными группами индикатора и положительно заряженными молекулами белка, реагируя с ними, в результате чего формируется относительно крупный комплекс из
    (check this in PDF content)

  10. Start
    8059
    Prefix
    Предположительно, молекула красителя образует мостик между двумя отрицательно заряженными группами индикатора и положительно заряженными молекулами белка, реагируя с ними, в результате чего формируется относительно крупный комплекс из белка и красителя, окрашенный в синий цвет
    Exact
    [9]
    Suffix
    . Данный краситель не образует окрашенного комплекса со свободными tection, which have specificity, sensitivity, reproducibility, rapidness and simplicity of performance in an equal degree, and also free of non-protein components effect.
    (check this in PDF content)

  11. Start
    8393
    Prefix
    Данный краситель не образует окрашенного комплекса со свободными tection, which have specificity, sensitivity, reproducibility, rapidness and simplicity of performance in an equal degree, and also free of non-protein components effect. Each protein determination method has its own advantages and disadvantages
    Exact
    [2]
    Suffix
    . The most popular and reliable methods used in the modern practice are: spectrophotometric determination of protein concentration, the Kingsley-Weichselbaum method, Lowry method and Bradford method [3].
    (check this in PDF content)

  12. Start
    8604
    Prefix
    The most popular and reliable methods used in the modern practice are: spectrophotometric determination of protein concentration, the Kingsley-Weichselbaum method, Lowry method and Bradford method
    Exact
    [3]
    Suffix
    . The spectrophotometric method is based on ultraviolet radiation absorption by aromatic amino acids (tyrosine, tryptophan and phenylalanine), which are constituents of protein molecule sequence.
    (check this in PDF content)

  13. Start
    8991
    Prefix
    The spectrophotometric method is based on ultraviolet radiation absorption by aromatic amino acids (tyrosine, tryptophan and phenylalanine), which are constituents of protein molecule sequence. The protein content is determined by the Kalckar formula, which allows excluding an nucleic acids effect in samples based on data on optical density at 280 and 260 nm
    Exact
    [4]
    Suffix
    . The Kingsley-Weichselbaum method was described for the first time in 1914. It colorimetric method based on the biuret reaction. The principle consists in the development of violet colored copper ions complex with protein molecules in the alkaline medium: oxygen atom binding with the copper ion takes place due to negative charge appearance that occurs upon splitting of hydrogen atom f
    (check this in PDF content)

  14. Start
    9426
    Prefix
    The principle consists in the development of violet colored copper ions complex with protein molecules in the alkaline medium: oxygen atom binding with the copper ion takes place due to negative charge appearance that occurs upon splitting of hydrogen atom from of the peptide bond enol group
    Exact
    [5]
    Suffix
    . Proteins and peptides that contain not less than 3 amino acids enter into the biuret reaction. The protein concentration is determined by the intensity of light absorption at a wavelength of 540–580 nm.
    (check this in PDF content)

  15. Start
    9721
    Prefix
    Proteins and peptides that contain not less than 3 amino acids enter into the biuret reaction. The protein concentration is determined by the intensity of light absorption at a wavelength of 540–580 nm. Biuret reactionsensitivity limit is restricted by protein concentration of 300 mg/l
    Exact
    [6]
    Suffix
    . The Lowry method is based on reaction with the FolinCiocalteu’s reagent, which active component is a molybdate, tungstate and phosphoric acid complex. In the course of biuret reaction and reduction of Folin reagent by cyclic amino acids [7] (primarily, tyrosin as well as tryptophan and phenylalanine, to a lesser degree by cystein), solution coloring takes place.
    (check this in PDF content)

  16. Start
    9973
    Prefix
    The Lowry method is based on reaction with the FolinCiocalteu’s reagent, which active component is a molybdate, tungstate and phosphoric acid complex. In the course of biuret reaction and reduction of Folin reagent by cyclic amino acids
    Exact
    [7]
    Suffix
    (primarily, tyrosin as well as tryptophan and phenylalanine, to a lesser degree by cystein), solution coloring takes place. The Lowry method is a hundred times more sensitive than the biuret method; however, it is not highly specific and physiologically active amines impair accurate determination the protein concentrations [8].
    (check this in PDF content)

  17. Start
    10326
    Prefix
    The Lowry method is a hundred times more sensitive than the biuret method; however, it is not highly specific and physiologically active amines impair accurate determination the protein concentrations
    Exact
    [8]
    Suffix
    . The Bradford assay with the Coomassie brilliant blue G-250 dye (CBB) use is high sensitive and simple. Presumably, the dye molecule forms a bridge between two negatively charged groups of indicator and positively charged protein molecules reacting with them; as a result, relatively large protein complex and the dye having blue color is formed [9].
    (check this in PDF content)

  18. Start
    10712
    Prefix
    Presumably, the dye molecule forms a bridge between two negatively charged groups of indicator and positively charged protein molecules reacting with them; as a result, relatively large protein complex and the dye having blue color is formed
    Exact
    [9]
    Suffix
    . This dye does not form a stained complex with free amino acids and low molecular weight oligopeptides аминокислотами и низкомолекулярными олигопептидами, содержащими менее 15 аминокислот, в то же время легко связываясь с основными аминокислотами: лизином, гистидином, аргинином [10, 11].
    (check this in PDF content)

  19. Start
    11072
    Prefix
    This dye does not form a stained complex with free amino acids and low molecular weight oligopeptides аминокислотами и низкомолекулярными олигопептидами, содержащими менее 15 аминокислот, в то же время легко связываясь с основными аминокислотами: лизином, гистидином, аргинином
    Exact
    [10, 11]
    Suffix
    . Целью данной работы являлся подбор оптимальных методов определения концентрации белковопептидных комплексов, содержащихся в комплексных водно-солевых экстрактах животного сырья и отдельных фракциях.
    (check this in PDF content)

  20. Start
    12195
    Prefix
    белково-пептидных комплексов проводили методом ступенчатой ультрафильтрации на установке Владисарт (Влидисарт, Россия) под давлением Р = 2,5 бар с использованием модулей из полиэфирсульфона с пластиковыми фиттингами и емкостями VivaFlow200 (Sartorius, Германия). В результате были получены фракции в диапазоне молекулярных масс менее 30кДа и более 30 кДа
    Exact
    [12]
    Suffix
    . Определение концентрации белка проводили четырьмя методами: прямое спектрофотометрическое определение концентрации белка, биуретовая реакция по методу Кингслея — Вейксельбаума, с помощью реактива Брэдфорда и методом Лоури.
    (check this in PDF content)

  21. Start
    12717
    Prefix
    Прямое спектрофотометрическое определение концентрации белка проводили путем измерения оптической плотности растворов при длинах волн 260 и 280 нм в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 1 см. Результаты оценивали с применением формулы Калькара
    Exact
    [13]
    Suffix
    . Метод Кингслея — Вейксельбаума использовался с применением полуавтоматического анализатора BioChemSA (HTI, США) по стандартным методикам, прилагаемым к реактивам (HTI, США). Колориметрический метод Лоури проводили по стандартной методике без предварительного осаждения белка, предложенной Оливером Х. в 1951 году [14].
    (check this in PDF content)

  22. Start
    13066
    Prefix
    Метод Кингслея — Вейксельбаума использовался с применением полуавтоматического анализатора BioChemSA (HTI, США) по стандартным методикам, прилагаемым к реактивам (HTI, США). Колориметрический метод Лоури проводили по стандартной методике без предварительного осаждения белка, предложенной Оливером Х. в 1951 году
    Exact
    [14]
    Suffix
    . Реакция белков с ионами Cu2+ происходила в щелочном растворе в присутствии восстанавливающегося фосфорномолибдено-вольфрамового реактива ( Folin&Ciocalteu’s phenol reagent, Sigma-Aldrich, Germany), содержание белка рассчитывали по калибровочному графику.
    (check this in PDF content)

  23. Start
    13693
    Prefix
    Оптическую плотность измеряли при длине волны 595 нм против контроля, содержащего вместо белка that contain less than 15 amino acids; at the same time, it easily binds with basic amino acids: lysine, histidine, arginine
    Exact
    [10, 11]
    Suffix
    . The aim of this studywas an optimal methods selection for detecting protein-peptide complexes contained in complex aqueous-salt extracts of animal raw material and individual fractions. Materialsand methods The main research subjects were the complex aqueoussalt extract based on porcine immunocompetent organs (thymus, spleen, mesenteric lymph nodes); fractions of this extract
    (check this in PDF content)

  24. Start
    14786
    Prefix
    -peptide complexes was carried out by the method of stepwise ultrafiltration on a Vladisart unit (Vladisart, Russia) under pressure of 2.5 bar using the polyethersulfone modules with plastic fittings and containers VivaFlow200 (Sartorius, Germany). As a result, fractions in a molecular weights range less than 30kDa and more than 30kD awere obtained
    Exact
    [12]
    Suffix
    . Protein concentration determination was carried out by four methods: the direct spectrophotometric protein concentration determination, the Kingsley-Weichselbaum biuret method, method with Bradford reagent use and the Lowry method.
    (check this in PDF content)

  25. Start
    15316
    Prefix
    The direct spectrophotometric protein concentration determination was carried out by measuring the optical density of solutions at wavelengths of 260 and 280 nm in quartz cuvettes with an optical path length of 1 cm. The results were assessed with the use of the Kalckar formula
    Exact
    [13]
    Suffix
    . The Kingsley-Weichselbaum biuret method was used with the semi-automatic analyzer BioChemSA (HTI, USA) according to the standard methods supplied with the reagents (HTI, USA). The colorimetric Lowry method was carried out by the standard methodology without a preliminary protein precipitation proposed by Oliver H.
    (check this in PDF content)

  26. Start
    15684
    Prefix
    The Kingsley-Weichselbaum biuret method was used with the semi-automatic analyzer BioChemSA (HTI, USA) according to the standard methods supplied with the reagents (HTI, USA). The colorimetric Lowry method was carried out by the standard methodology without a preliminary protein precipitation proposed by Oliver H. Lowry in 1951
    Exact
    [14]
    Suffix
    . The reaction of proteins with Cu2+ occurred in the alkaline solution in a presence of the reducing reagent containing molybdate, tungstate and phosphoric acid (Folin&Ciocalteu’s phenol reagent, Sigma-Aldrich, Germany); the protein concentration was calculated by using the calibration curve.
    (check this in PDF content)

  27. Start
    16399
    Prefix
    The optical density was measured at a wavelength of 595 nm against the conводу. Концентрацию белка определяли по калибровочному графику, для построения которого использовали стандартный раствор сывороточного альбумина 0,5 мг/мл (BCA)
    Exact
    [15]
    Suffix
    . Результаты и обсуждение Определение концентрации белка в экстракте показало, что биуретовым методом можно определить максимальное количество белковых соединений, в то время как показатели, полученные спектрофотометрическим методом и методами Лоури и Брэдфорда, были занижены более чем на 20 процентов.
    (check this in PDF content)

  28. Start
    17885
    Prefix
    Присутствие в экстракте нуклеиновых кислот и нуклеотидов практически не повлиял на анализ белtrol, which contained water instead of protein. The protein concentration was determined by using the calibration curve, in which construction the standard solution of serum albumin (0.5 mg/ml) (BSA) was used
    Exact
    [15]
    Suffix
    . Results and discussion Protein concentration determination in the extract showed that it is possible to determined the maximum protein compounds amount by the biuret method, while the levels obtained by the spectrophotometric method, the Lowry method and the Bradford method were underestimated by more than 20 percent.
    (check this in PDF content)

  29. Start
    19939
    Prefix
    Под об на я погрешность может свидетель ствовать о том, что пр оизошло чрезв ычайно акт ив ное связывание с аргинином и гидрофоб ными аминокислотны ми ос татка ми (в случае с метод ом Брэдфорда), а также об акт ив ном восстана вливающе м влиянии вод ы с пониженным сод ержанием дейтерия (в случае с м етод ом Л оури), ч то б ыло показа но ранее
    Exact
    [16]
    Suffix
    . Ана лиз данных, полученных при исследов ании низкомолекулярной фра кции (с молекулярной массой менее 30 кД а), показа л, что в данном случае недопустим о ис пользование биуретов ой реакции ввиду слишком малого содержа ния белка в об ра зце, в подоб ной сит уации об ра зе ц следует сконцент рировать (на пример, лиофильно высушить), кроме того биуре тов ая реакция не позволя
    (check this in PDF content)

  30. Start
    21051
    Prefix
    При об суждении полученных ре зуль татов сле дует об ра тит ь внимание при оценке концент ра ции белка в экстра кт е навзаим одействие реактив а Кумассисо строго определенными аминокислотами боковых це пе й мол екулы белка, поскольку ос таль ны е белковые соединения, в сос таве которых не т аргинина и ароматич еских кислот, выпадают из ана литич еской выборки
    Exact
    [17,18]
    Suffix
    . Таким об ра зом, от мечено за ведомое за нижение ре зуль татов при ис пользовании метода Брэдфордот носит ель но метода Лоури. При ана лизе не извест ны х по белковом у сос таву жидкостей также сложно подоб ра ть не об ходим ый стандарт для построения ка либровочной кривой, в связи с чем выну жденное ис пользование станд арт а БС А может также влиять на полученные данные[
    (check this in PDF content)

  31. Start
    21414
    Prefix
    При ана лизе не извест ны х по белковом у сос таву жидкостей также сложно подоб ра ть не об ходим ый стандарт для построения ка либровочной кривой, в связи с чем выну жденное ис пользование станд арт а БС А может также влиять на полученные данные
    Exact
    [19]
    Suffix
    . Калибровоч ны е кривые, построенные 15,017 11,65811,65811,763 0,000 5,000 10,000 15,000 20,000 1234 А 44,050 23,91221,518 41,308 0,000 10,000 20,000 30,000 40,000 50,000 60,000 1234 Б * 0,237 0,057 0,010 0,000 0,100 0,200 0,300 1234 ВFig. 1.
    (check this in PDF content)

  32. Start
    23248
    Prefix
    Подобная погрешность может свидетельствовать о том, что произошло чрезвычайно активное связывание с аргинином и гидрофобными аминокислотными остатками (в случае с методом Брэдфорда), а также об активном восстанавливающем влиянии воды с пониженным содержанием дейтерия (в случае с методом Лоури), что было показано ранее
    Exact
    [16]
    Suffix
    . Анализ данных, полученных при исследовании низкомолекулярной фракции (с молекулярной массой менее 30 кДа), показал, что в данном случае недопустимо использование биуретовой реакции ввиду слишком малого содержания белка в образце, в подобной ситуации образец следует сконцентрировать (например, лиофильно высушить), кроме того биуретовая реакция не позволяет определят
    (check this in PDF content)

  33. Start
    24430
    Prefix
    При обсуждении полученных результатов следует обратить внимание при оценке концентрации белка в экстракте на взаимодействие реактива Кумасси со строго определенными аминокислотами боковых цепей молекулы белка, поскольку остальные белковые соединения, в составе которых нет аргинина и ароматических кислот, выпадают из аналитической выборки
    Exact
    [17, 18]
    Suffix
    . Таким образом, отмечено заведомое занижение результатов при использовании метода Брэдфорд относительно метода Лоури. При анализе неизвестных по белковому составу жидкостей также сложно подобрать необходимый стандарт для построения калибровочной кривой, в связи с чем вынужденное использование стандарта БСА может также влиять на полученные данные [19].
    (check this in PDF content)

  34. Start
    24833
    Prefix
    При анализе неизвестных по белковому составу жидкостей также сложно подобрать необходимый стандарт для построения калибровочной кривой, в связи с чем вынужденное использование стандарта БСА может также влиять на полученные данные
    Exact
    [19]
    Suffix
    . Калибровочные кривые, построенные по результатам спектрофотометрического исследования, являются более четкими и позволяют использовать данную методику без риска потерять при определении концентрации белка низкомолекулярные пептидные соединения, которые обладают наибольшей функциональной активностью и являются целевыми, однако в данном случае на результ
    (check this in PDF content)

  35. Start
    25349
    Prefix
    и позволяют использовать данную методику без риска потерять при определении концентрации белка низкомолекулярные пептидные соединения, которые обладают наибольшей функциональной активностью и являются целевыми, однако в данном случае на результаты могут влиять технические и конструктивные характеристики приборов, с использованием которых проводится анализ
    Exact
    [20,21]
    Suffix
    . composition by the spectrophotometric method; deviation from the general biuret method was not more than 7 %. The use of Lowry and Bradford methods also gave results that were similar to each other; however, they differed from the data obtained by the biuret method and the spectrophotometric method by more than two times.
    (check this in PDF content)

  36. Start
    26011
    Prefix
    This discrepancy can be indicative of an extremely active binding with arginine and hydrophobic amino acid residues (in case of the Bradford method) and of an active reducing effect of water with lowered deuterium content (in case ofthe Lowry method), which was shown earlier
    Exact
    [16]
    Suffix
    . Analysis of the data obtained when studying the low molecular weight fraction (with molecular weight less than 30 kDa) shows that in this case, it is infeasible to use the biuret reaction because of too low protein content in a sample; in this situation, a sample is to be concentrated (for example, lyophilized).
    (check this in PDF content)

  37. Start
    27168
    Prefix
    While discussing obtained results and assessing a protein concentration in an extract, it is necessary to pay attention to the interaction of the Coomassie reagent with specific amino acids of the side chains of the protein molecule, as other protein compounds that do not contain arginine and aromatic acids fall out of the analytical sample
    Exact
    [17, 18]
    Suffix
    . Therefore, undoubted underestimation of the results when using the Bradford method compared to the Lowry method was noted. In analysis of liquids with an unknown protein content, it is also difficult to choose a needed standard for constructing a calibration curve.
    (check this in PDF content)

  38. Start
    27585
    Prefix
    In analysis of liquids with an unknown protein content, it is also difficult to choose a needed standard for constructing a calibration curve. In this connection, the necessary use of the BSA standard can also influence the obtained data
    Exact
    [19]
    Suffix
    . Calibration curves constructed by the results of the spectrophotometric analysis, are more clear and allow using this method without a risk of losing low molecular weight peptide substances, which have the highest functional activity and are a target, in determination of the protein concentration.
    (check this in PDF content)

  39. Start
    28043
    Prefix
    analysis, are more clear and allow using this method without a risk of losing low molecular weight peptide substances, which have the highest functional activity and are a target, in determination of the protein concentration. However, in this case, the results can be influenced by technical and design features of equipment, which is used in analysis
    Exact
    [20, 21]
    Suffix
    . Заключение Таким образом, можно сделать вывод, что при количественном определении содержания белка в экстрактах на основе сырья животного происхождения, с широким спектром белково-пептидных соединений, наибольшей точностью обладает биуретовый метод.
    (check this in PDF content)