The 32 reference contexts in paper A. Mazurov V., V. Spiridonova A., А. Мазуров В., В. Спиридонова А. (2017) “АПТАМЕРЫ — НОВЫЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СУБСТАНЦИИ ДЛЯ АНТИКОАГУЛЯНТОВ // APTAMERS ARE NEW PHARMACOLOGICAL SUBSTANCES FOR THE DEVELOPMENT OF ANTICOAGULANTS” / spz:neicon:aterotromboz:y:2017:i:1:p:134-144

  1. Start
    559
    Prefix
    Некоторые аптамеры могут также ингибировать функциональную активность своих молекулярных мишеней. Название «аптамер» происходит от латинского слова «aptus» — подходить, соответствовать
    Exact
    [1—3]
    Suffix
    . Первичные аптамеры получают с помощью метода SELEX (Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment, системная эволюция лигандов с помощью экспоненциального обогащения) путем их отбора из библиотеки случайно синтезированных олигонуклеотидов по способности к связыванию с молекулоймишенью.
    (check this in PDF content)

  2. Start
    4261
    Prefix
    Такие процедуры позволяют сконструировать наиболее короткие аптамеры с наиболее высокой способностью к связыванию с молекулой-мишенью. Кроме этого, аптамеры могут быть химически модифицированы, например, с целью увеличения их стабильности (см. ниже)
    Exact
    [1—3]
    Suffix
    . Аптамеры по показателям специфичности и сродства к молекулам-мишеням близки к моноклональным антителам. В связи с этим иногда их называют химическими, (олигонуклеотидными) аналогами антител. Как и моноклональные антитела, аптамеры используют в исследовательских целях для детекции и блокирования функции биологически активных молекул, а также в фармакологии — в качестве субстанций для лекарствен
    (check this in PDF content)

  3. Start
    6164
    Prefix
    Кроме того, для замедления выведения аптамеров через почки можно увеличить их молекулярную массу, что обычно достигается прикреплением к одному из концов олигонуклеотида (обычно 5’) высокомолекулярного (10—40 кДа) полиэтиленгликоля (ПЭГ, PEG). Такие аптамеры иногда называют пегилированными
    Exact
    [1—3]
    Suffix
    . Первым лекарством, созданным на основе аптамеров, был препарат пегаптаниб (pegaptanib) – пегилированный аптамер, блокирующий фактор роста эндотелия сосудов (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF) и разрешенный в 2004 г. к применению в офтальмалогии для лечения влажной макулодистрофии сетчатки.
    (check this in PDF content)

  4. Start
    6903
    Prefix
    В настоящее время на различных стадиях клинических испытаний находятся десятки аптамерных препаратов, предлагаемых для лечения онкологических, сердечно-сосудистых, воспалительных и других заболеваний. Для применения в качестве антикоагулянтов разрабатываются аптамеры против фактора Виллебранда, фактора IX и тромбина
    Exact
    [1—4]
    Suffix
    . Аптамер против фактора Виллебранда Фактор Виллебранда (фВБ) — это мультимерный гликопротеин (ГП), состоящий из мономерных 250-кДа субъединиц (от двух до нескольких десятков) и имеющий молекулярную массу от 500 до 20000 кДа.
    (check this in PDF content)

  5. Start
    8448
    Prefix
    При существенном сужении просвета артериальных сосудов (в результате стенозирования и/или спазма), т. е. в условиях кровотока, характеризующихся высокими скоростями сдвига (различия в скоростях движения слоев жидкости относительно друг друга), фВБ, взаимодействуя с ГП Ib и ГП IIb-IIIa, может самостоятельно стимулировать не только адгезию, но и активацию и последующую агрегацию тромбоцитов
    Exact
    [5]
    Suffix
    . Аптамер ARC1779 направлен против А1 домена в фВБ — участка белка, обеспечивающего его связывание с ГП Ib. Блокада этого домена предотвращает взаимодействие фВБ с тромбоцитами и, соответственно, фВБ-зависимые адгезию, активацию и агрегацию тромбоцитов.
    (check this in PDF content)

  6. Start
    9252
    Prefix
    К 3’-концу олигонуклеотида для его защиты прикреплен инвертированный дезокситимидин, а к 5’-концу – 20-кДа ПЭГ, как для защиты, так и для увеличения молекулярной массы аптамера (олигонуклеотид имеет мол. массу ~13 кДА) и замедления его выведения из кровотока
    Exact
    [6—8]
    Suffix
    . Доклинические исследования ARC1779 в моделях in vitro и ex vivo доказали его способность эффективно ингибировать фВБ-зависимую адгезию тромбоцитов к коллагену и субэндотелиальному матриксу сосудов, а также фВБ-зависимую агрегацию в условиях высоких скоростей сдвига.
    (check this in PDF content)

  7. Start
    9777
    Prefix
    При этом ARC1779 не влиял на агрегацию тромбоцитов, индуцированную такими агонистами, как АДФ и арахидоновая кислота. В модели тромбоза на обезьянах ARC1779 предотвращал образование окклюзивных тромбов после повреждения каротидных артерий
    Exact
    [6—8]
    Suffix
    . Первая фаза клинических испытаний ARC1779 проводилась в группе здоровых добровольцев с целью оценки безопасности его внутривенного введения и первичного исследования фармакокинетики и фармакодинамики.
    (check this in PDF content)

  8. Start
    11206
    Prefix
    Благодаря защитным модификациям аптамера и присоединению 20-кДа ПЭГ, время полужизни (t1/2) ARC1779 составило около 2 часов после болюсного введения (немодифицированные аптамеры обычно выводятся из кровотока в течение 10—15 мин)
    Exact
    [9]
    Suffix
    . Дальнейшие клинические испытания ARC1779 в рамках фазы II проводились по двум основным направлениям. Во-первых, в небольших группах больных с редкими заболеваниями, обусловленными патологически высокой активностью фВБ, к которым относятся тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ТТП) и болезнь Виллебранда 2b-типа.
    (check this in PDF content)

  9. Start
    11752
    Prefix
    Повышенная активность фВБ при ТТП обусловлена появлением в кровотоке сверхкрупных мультимеров этого белка в связи со снижением содержания протеазы ADAMTS-13, в нормальных условиях разрушающей такие мультимеры
    Exact
    [10]
    Suffix
    , а при болезни Виллебранда 2b-типа — мутациями в А1 домене белка, повышающими его сродство к ГП Ib [11]. В обоих случаях это приводит к образованию внутрисосудистых тромбоцитарных агрегатов/тромбов, образующихся вследствие спонтанного взаимодействия тромбоцитов с патологически активным фВБ, и снижению числа циркулирующих тромбоцитов (тромбоцитопении).
    (check this in PDF content)

  10. Start
    11861
    Prefix
    Повышенная активность фВБ при ТТП обусловлена появлением в кровотоке сверхкрупных мультимеров этого белка в связи со снижением содержания протеазы ADAMTS-13, в нормальных условиях разрушающей такие мультимеры [10], а при болезни Виллебранда 2b-типа — мутациями в А1 домене белка, повышающими его сродство к ГП Ib
    Exact
    [11]
    Suffix
    . В обоих случаях это приводит к образованию внутрисосудистых тромбоцитарных агрегатов/тромбов, образующихся вследствие спонтанного взаимодействия тромбоцитов с патологически активным фВБ, и снижению числа циркулирующих тромбоцитов (тромбоцитопении).
    (check this in PDF content)

  11. Start
    12582
    Prefix
    В этих же исследованиях была продемонстрирована способность ARC1779 повышать количество тромбоцитов как при ТТП (у 5 из 7 включенных в исследование пациентов), так и при болезни Виллебранда 2b-типа (у всех трех обследованных больных)
    Exact
    [12, 13]
    Suffix
    . Второе направление клинических испытаний ARC1779 было связано с изучением антитромботических свойств ARC1779 в небольшой группе больных (по 18 больных в группе ARC1779 и контрольной группе), которым проводили каротидную эндартерэктомию.
    (check this in PDF content)

  12. Start
    13330
    Prefix
    Несмотря на хороший общий профиль безопасности, у нескольких больных на фоне введения ARC1779 отмечалось повышение кровоточивости — мелкие кровотечения у 6 и крупное кровотечение у 1 из 18 испытуемых
    Exact
    [14]
    Suffix
    . Все клинические исследования ARC1779 были проведены и опубликованы до конца 2012 г. Причины остановки дальнейших исследований остаются неясными. В частности, были прерваны испытания аптамера при проведении каротидной эндартерэктомии и так и не были начаты запланированные испытания у больных с инфарктом миокарда при проведении чрескожных коронарных вмешательств (ЧКВ).
    (check this in PDF content)

  13. Start
    15407
    Prefix
    тромбоцитами) образует с фактором X и при участии активированного фактора VIII (кофактора) и ионов кальция так называемый внутренний (intrinsic) теназный (X-азный) комплекс (внешний теназный комплекс формируется фактором X и активированным фактором VII). Образующийся при работе теназных комплексов активированный фактор X, в свою очередь, катализирует превращение протромбина в тромбин
    Exact
    [15]
    Suffix
    . RB006 (пегнивакоджен, «pegnivacogen») представляет собой модифицированный РНК олигонуклеотид, состоящий из 31 нуклеотида и защищенный с 3’-конца инвертированным дезокситимидином. К 5’-концу олигонуклеотида для его защиты и увеличения общей массы молекулы присоединен 40 кДа ПЭГ (масса немодифицированного аптамера ~10 кДа).
    (check this in PDF content)

  14. Start
    16061
    Prefix
    RB006 предлагается применять в клинической практике вместе с его антидотом — RB007 (анивамерсен, «anivamersen»), комплементарным олигонуклеотидом (15 нуклеотидных остатков), который используется для контролируемого прекращения действия RB006. RB006 и RB007 совместно называют REG1-антикоагулянтной системой
    Exact
    [16]
    Suffix
    . В доклинических исследованиях было продемонстрировано, что аптамер против фактора IX как in vitro, так и при введении лабораторным животным удлиняет время свертывания в тестах: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) и активированное время свертывания (АВС), т. е. в тестах внутреннего пути, но не влияет на время свертывания в тесте протромбинового времени (ПВ), т. е. в тесте внеш
    (check this in PDF content)

  15. Start
    16843
    Prefix
    В этих исследованиях аптамер против фактора IX с условным названием 9.3t. Этот аптамер имеет сходную с RB006 олигонуклеотидную последовательность, но содержит на 5’-конце не высокомолекулярный ПЭГ, а холестерин
    Exact
    [17, 18]
    Suffix
    . Первая фаза клинических исследований REG1-системы (исследование Regado 1a), проводимая на здоровых добровольцах, продемонстрировала безопасность ее применения, эффективность подавления активности IX-фактора с помощью RB006 и возможность блокировки его действия с помощью RB007.
    (check this in PDF content)

  16. Start
    17793
    Prefix
    Однако введение RB007 через 3 часа после введения RB006 (в двукратных весовых дозировках по сравнению с RB006) контролируемо блокировало действие последнего и приводило к восстановлению нормальных значений АЧТВ
    Exact
    [16]
    Suffix
    . Аналогичные результаты были получены и в рамках фазы 1b, выполненной на больных со стабильной стенокардией, получавших (в отличие от добровольцев) стандартную одинарную или двойную антитромбоцитарную терапию.
    (check this in PDF content)

  17. Start
    18256
    Prefix
    Введение RB006 в дозах до 75 мг/кг хорошо переносилось пациентами, и ни у одного из них не было зафиксировано крупных геморрагических осложнений. RB006 дозозависимо удлинял АЧТВ и АВС, а RB007 полностью блокировал активность основного аптамера
    Exact
    [19]
    Suffix
    . Вторая фаза клинических испытаний системы REG1 была выполнена в группе больных с ИБС, которым проводилось ЧКВ. Введение RB006/RB007 сравнивали по показателям безопасности и эффективности с введением гепарина.
    (check this in PDF content)

  18. Start
    19319
    Prefix
    Исследования показали безопасность болюсного введения RB006 в дозе 1 мг/кг непосредственно перед выполнением ЧКВ в двух вариантах последующего ингибирования его действия с помощью RB007 — (1) частичное ингибирование после проведения ЧКВ + полное ингибирование через 4 часа после ЧКВ и (2) полное ингибирование сразу после ЧКВ
    Exact
    [20]
    Suffix
    . В 2b-фазу (исследование RADAR) было включено 640 пациентов с ОКС без подъема сегмента ST. Все больные получали адекватную антитромбоцитарную терапию (аспирин, антагонисты P2Y12-рецепторов АДФ и часть больных — антагонисты ГП IIb-IIIa).
    (check this in PDF content)

  19. Start
    20734
    Prefix
    Частота тромботических осложнений в течение 30 дней в группе RB006/RB007 (все подгруппы) была несколько ниже, чем в группе гепарина, однако эти отличия не достигали достоверного уровня — 3,0% и 5,1% соответственно (p = 0,1). К важным наблюдениям этого исследования следует отнести регистрацию 3 случаев развития аллергических осложнений среди больных, получавших RB006
    Exact
    [21]
    Suffix
    . Третья фаза клинических испытаний REG1системы (исследование REGULATE-PCI) проводилась в группе больных с ИБС, которым выполнялись ЧКВ. В исследование включались больные со стабильной стенокардией (около половины), нестабильной стенокардией (около 30%), а также больные, недавно перенесшие инфаркт миокарда (больные с острым инфарктом в исследование не включались).
    (check this in PDF content)

  20. Start
    22649
    Prefix
    При этом общая частота зарегистрированных кровотечений (крупных и мелких) была достоверно выше в группе REG1 (6%, n = 104) по сравнению с группой бивалирудина (4%, n = 65), хотя частота крупных кровотечений в связи с их небольшим количеством достоверно не отличалась (n = 7 и n = 2 в группах REG1 и бивалирудина соответственно)
    Exact
    [22]
    Suffix
    . Последующие исследования патогенеза аллергических реакций, потребовавших остановки исследования REGULATE-PCI (см. выше), показали, что их развитие было обусловлено наличием у части пациентов предсуществующих антител против ПЭГ (не реагирующих с олигонуклеотидной частью RB006).
    (check this in PDF content)

  21. Start
    23509
    Prefix
    Учитывая, что 40-кДа ПЭГ составляет 80% от общей массы RB006 (на неиммуногенный 10-кДа олигонуклеотид приходится лишь 20% массы), введение препарата в дозе 1 мг/кг соответствует попаданию в кровоток приблизительно 64 мг ПЭГ (при весе пациента 80 кг) и достижению его концентрации в плазме около 20 мкг/мл
    Exact
    [23, 24]
    Suffix
    . Таким образом, относительно высокая частота серьезных аллергических реакций, отсутствие преимуществ по показателям антитромботической эффективности и большая частота кровотечений по сравнению с бивалирудином очевидно указывают на бесперспективность дальнейших исследований пегилированного аптамера RB006 (пегнивакоджена) против фактора IX и его антидота RB007 (анивамерсена).
    (check this in PDF content)

  22. Start
    25175
    Prefix
    Оба субстрата тромбина в этих реакциях — и фибриноген, и PAR-рецептор — связываются в его составе с экзосайтом 1, и уже затем в результате протеолитического действия активного (каталитического) центра фермента и отщепления от субстратов соответствующих пептидов происходит образование фибрина из фибриногена и активация PAR-рецепторов
    Exact
    [25]
    Suffix
    . Антикоагулянтные препараты, относящиеся к классу прямых ингибиторов тромбина, блокируют или только активный центр (дабигантан и аргатробан), или активный центр и экзосайт 1 (бивалирудин) [26].
    (check this in PDF content)

  23. Start
    25371
    Prefix
    протеолитического действия активного (каталитического) центра фермента и отщепления от субстратов соответствующих пептидов происходит образование фибрина из фибриногена и активация PAR-рецепторов [25]. Антикоагулянтные препараты, относящиеся к классу прямых ингибиторов тромбина, блокируют или только активный центр (дабигантан и аргатробан), или активный центр и экзосайт 1 (бивалирудин)
    Exact
    [26]
    Suffix
    . Аптамеры против тромбина, способные ингибировать его функциональную активность, были описаны еще в 1992 г. Боком (Bock) и соавт. [27]. Полученный в этой работе ДНКаптамер состоял из 15 нуклеотидов (последовательность — 5’-GGTTGGTGTGGTTGG-3’) и получил название 15TBA (TBA — Thrombin Binding Aptamer, связывающийся с тромбином аптамер, другие названия — 15-mer, HD1).
    (check this in PDF content)

  24. Start
    25518
    Prefix
    Антикоагулянтные препараты, относящиеся к классу прямых ингибиторов тромбина, блокируют или только активный центр (дабигантан и аргатробан), или активный центр и экзосайт 1 (бивалирудин) [26]. Аптамеры против тромбина, способные ингибировать его функциональную активность, были описаны еще в 1992 г. Боком (Bock) и соавт.
    Exact
    [27]
    Suffix
    . Полученный в этой работе ДНКаптамер состоял из 15 нуклеотидов (последовательность — 5’-GGTTGGTGTGGTTGG-3’) и получил название 15TBA (TBA — Thrombin Binding Aptamer, связывающийся с тромбином аптамер, другие названия — 15-mer, HD1).
    (check this in PDF content)

  25. Start
    26352
    Prefix
    этому связыванию 15TBA ингибирует взаимодействие экзосайта 1 с субстратами тромбина — фибриногеном и PAR-рецепторами и, соответственно, ингибирует образование фибрина из фибриногена и индуцируемую тромбином активацию и агрегацию тромбоцитов. При этом в отличие от других известных ингибиторов тромбина (см. выше) он не влияет непосредственно на активный (каталитический) центр фермента
    Exact
    [28—31]
    Suffix
    . Возможность подавления функции тромбина аптамером 15TBA была РИСУНОК 1.Структура антитромбиновых ДНК-аптамеров — 15TBA (а) и RE31 (б) Штриховые линии — водородные связи продемонстрирована не только in vitro, но и in vivo в моделях на экспериментальных животных [32, 33].
    (check this in PDF content)

  26. Start
    26731
    Prefix
    Возможность подавления функции тромбина аптамером 15TBA была РИСУНОК 1.Структура антитромбиновых ДНК-аптамеров — 15TBA (а) и RE31 (б) Штриховые линии — водородные связи продемонстрирована не только in vitro, но и in vivo в моделях на экспериментальных животных
    Exact
    [32, 33]
    Suffix
    . Антитромбиновый аптамер 15TBA и два других аптамера против экзосайта 1 с похожими свойствами, 15-звенный аптамер ARC183 и 26-звенный аптамер второго поколения ARC1172 (NU172), были протестированы в рамках первой фазы клинических испытаний в группах здоровых добровольцев.
    (check this in PDF content)

  27. Start
    27518
    Prefix
    Исследования показали относительную безопасность введения аптамеров и возможность достижения с их помощью высокого уровня антикоагуляции. Однако дозировки аптамеров для поддержания антикоагулянтного эффекта были крайне велики
    Exact
    [4]
    Suffix
    . Тем не менее для аптамера NU172 была инициирована вторая фаза клинических исследований в группе пациентов, которым проводилась операция АКШ. Главной целью этой фазы была проверка безопасности и первичной эффективности на пациентах.
    (check this in PDF content)

  28. Start
    28711
    Prefix
    Этот аптамер состоит из 31 нуклеотида и, кроме характерных для 15TBA аптамера Gквадруплексной структуры, двух T-T— и одной T-G-T-петлей, содержит также шарнирную область, соединенную с 5 парами комплементарных оснований (дуплексная область), симметрично расположенными относительно центрального квадруплекса (рис. 1б)
    Exact
    [30, 34]
    Suffix
    . Изучение структуры комплекса RE31 с тромбином показало, что его связывание с белком идет по тому же механизму, что и 15TBA: через малые петли Т-Т — и с участием тех же аминокислотных остатков со стороны тромбина [30].
    (check this in PDF content)

  29. Start
    28938
    Prefix
    Изучение структуры комплекса RE31 с тромбином показало, что его связывание с белком идет по тому же механизму, что и 15TBA: через малые петли Т-Т — и с участием тех же аминокислотных остатков со стороны тромбина
    Exact
    [30]
    Suffix
    . Однако RE31 существенно эффективнее, чем 15TBA, ингибирует протромботические реакции тромбина — катализируемое тромбином образование фибрина из фибриногена (тесты — тромбиновое время, протромбиновое время и АЧТВ) и тромбин-индуцированную агрегацию тромбоцитов [31, 34, 35].
    (check this in PDF content)

  30. Start
    29219
    Prefix
    Однако RE31 существенно эффективнее, чем 15TBA, ингибирует протромботические реакции тромбина — катализируемое тромбином образование фибрина из фибриногена (тесты — тромбиновое время, протромбиновое время и АЧТВ) и тромбин-индуцированную агрегацию тромбоцитов
    Exact
    [31, 34, 35]
    Suffix
    . Эти данные указывают на то, что наличие шарнирного и дуплексногого участка в RE31 очевидно повышает сродство и ингибирующую активность аптамера по отношению к тромбину. В качестве лекарственного средства предлагается использовать модифицированный вариант RE31 с защищенными концевыми нуклеотидами и содержащий присоединенный по 5’-концу ПЭГ [36].
    (check this in PDF content)

  31. Start
    29580
    Prefix
    Эти данные указывают на то, что наличие шарнирного и дуплексногого участка в RE31 очевидно повышает сродство и ингибирующую активность аптамера по отношению к тромбину. В качестве лекарственного средства предлагается использовать модифицированный вариант RE31 с защищенными концевыми нуклеотидами и содержащий присоединенный по 5’-концу ПЭГ
    Exact
    [36]
    Suffix
    . В ходе проведения доклинических исследований модифицированного RE31 в модели тромбоза на крысах была показана принципиальная возможность подавления артериального тромбообразования с помощью этого аптамера [37].
    (check this in PDF content)

  32. Start
    29803
    Prefix
    В ходе проведения доклинических исследований модифицированного RE31 в модели тромбоза на крысах была показана принципиальная возможность подавления артериального тромбообразования с помощью этого аптамера
    Exact
    [37]
    Suffix
    . Таким образом, модифицированный антитромбиновый аптамер RE31 является перспективной молекулой для создания на его основе эффективного антикоагулянта — прямого ингибитора тромбина для внутривенного введения.
    (check this in PDF content)