-
- Start
-
2277
- Prefix
-
Введение
Реакция трансплантат против хозяина (РТПХ)
представляет собой иммунную реакцию клеточного типа, развивающуюся при переносе зрелых
Т-лимфоцитов неспособному к их отторжению
хозяину в условиях тканевой несовместимости
донора и реципиента
- Exact
-
[10]
- Suffix
-
. Существует несколько ситуаций, при которых возможно ее развитие:
введение лимфоидных клеток несовместимым
новорожденным или взрослым иммунокомпрометированным реципиентам (недостаточность
Т-системы различной этиологии, облучение,
введение цитостатических препаратов), полуаллогенный перенос лимфоцитов родительских
линий гибридам первого поколения.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
3243
- Prefix
-
На экспериментальных моделях РТПХ было показано,
что реакция может быть направлена на антигены MHC класса I, MHC класса II, на те и другие вместе или на отдельные минорные антигены комплекса гистосовместимости
- Exact
-
[39]
- Suffix
-
. Острая
РТПХ обусловлена различиями по антигенам
MHC классов I и II, приводит к выраженной цитотоксической реакции трансплантированных
клеток против тканей хозяина и часто заканчивается гибелью реципиента.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
4055
- Prefix
-
При хронической РТПХ могут
наблюдаться нарушения гемо- и иммунопоэза,
сопровождающиеся как иммунодефицитными
состояниями, так и лимфопролиферативными
процессами и аутоиммунными расстройствами,
возникают поражения кожи, кишечника и других внутренних органов
- Exact
-
[18, 34]
- Suffix
-
. Первоначально
острая РТПХ считалась Th1-зависимым, а хроническая РТПХ – Th2-зависимым процессом
[25, 30, 37, 42]. Однако сейчас стало очевидным,
что обе Th-субпопуляции участвуют, хотя и в разной степени, в развитии острой и хронической
форм РТПХ.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
4162
- Prefix
-
При хронической РТПХ могут
наблюдаться нарушения гемо- и иммунопоэза,
сопровождающиеся как иммунодефицитными
состояниями, так и лимфопролиферативными
процессами и аутоиммунными расстройствами,
возникают поражения кожи, кишечника и других внутренних органов [18, 34]. Первоначально
острая РТПХ считалась Th1-зависимым, а хроническая РТПХ – Th2-зависимым процессом
- Exact
-
[25, 30, 37, 42]
- Suffix
-
. Однако сейчас стало очевидным,
что обе Th-субпопуляции участвуют, хотя и в разной степени, в развитии острой и хронической
форм РТПХ. В настоящее время существует много не решенных вопросов, касающихся механизмов развития РТПХ, особенно ее хронической
формы, и участия в них различных цитокинов
и субпопуляций регуляторных клеток [29].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
4513
- Prefix
-
В настоящее время существует много не решенных вопросов, касающихся механизмов развития РТПХ, особенно ее хронической
формы, и участия в них различных цитокинов
и субпопуляций регуляторных клеток
- Exact
-
[29]
- Suffix
-
.
Выраженность и характер развития РТПХ,
как и других многокомпонентных и многоступенчатых иммунных процессов, находится под
регулирующим влиянием системы цитокинов.
РТПХ вызывает «цитокиновый шторм», характеризующийся резким изменением уровня
и спектра продуцируемых цитокинов [21].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
4797
- Prefix
-
Выраженность и характер развития РТПХ,
как и других многокомпонентных и многоступенчатых иммунных процессов, находится под
регулирующим влиянием системы цитокинов.
РТПХ вызывает «цитокиновый шторм», характеризующийся резким изменением уровня
и спектра продуцируемых цитокинов
- Exact
-
[21]
- Suffix
-
. Особенно важным в развитии той или иной формы
реакции является преимущественная активация
Т-хелперных клеток донора 1 или 2 типа и, соответственно, баланс про- и противовоспалительных цитокинов на ранних стадиях реакции.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
5273
- Prefix
-
Московский проспект, 197
Хроническая РТПХ в полуаллогенной системе
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 может развиваться
по двум направлениям с преимущественным доминированием Th1- или Th2-зависимых процессов, приводя к разным иммунопатологическим
исходам
- Exact
-
[1, 3, 6]
- Suffix
-
. Целью настоящего исследования
было оценить участие цитокинов в формировании Th1- и Th2-зависимых вариантов хронической РТПХ.
Материалы и методы
Животные. В работе использовали мышей –
гибридов первого поколения (C57Bl/6xDBA/2)
F1 (B6D2F1) и мышей линии DBA/2, самок
в возрасте 2 месяцев, полученных из лаборатории
экспериментальных животных (моделей) Института клинической иммунологии СО РАМН
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
6112
- Prefix
-
Хроническую
РТПХ индуцировали путем переноса гибридам
B6D2F1 лимфоидных клеток родительской линии DBA/2. Клетки селезенки вводили внутривенно реципиентам в дозе 60-70 × 106 клеток двукратно с интервалом в 5 дней
- Exact
-
[2, 28]
- Suffix
-
. В качестве
контрольной группы использовали интактных
животных того же генотипа, пола, возраста, что
и в опыте.
Определение белка в моче. Наличие поражения почек, сопровождающегося нарушением
фильтрации и проявляющегося протеинурией,
определяли по появлению белка в моче в концентрации, превышающей 3 мг/мл, что коррелирует с развитием гломерулонефрита [4].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
6476
- Prefix
-
Наличие поражения почек, сопровождающегося нарушением
фильтрации и проявляющегося протеинурией,
определяли по появлению белка в моче в концентрации, превышающей 3 мг/мл, что коррелирует с развитием гломерулонефрита
- Exact
-
[4]
- Suffix
-
.
Количество белка в моче определяли колориметрически с красителем Кумасси бриллиантовый
синий (Kumsai brillant blue, Loba Feinchemie)
при λ = 570 нм. Калибровочную кривую строили
по BSA (100-1000 мкг/мл), результаты выражали
в мг/мл [15].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
6712
- Prefix
-
Количество белка в моче определяли колориметрически с красителем Кумасси бриллиантовый
синий (Kumsai brillant blue, Loba Feinchemie)
при λ = 570 нм. Калибровочную кривую строили
по BSA (100-1000 мкг/мл), результаты выражали
в мг/мл
- Exact
-
[15]
- Suffix
-
.
Определение цитокинов. Содержание цитокинов определяли в сыворотке крови реципиентов
и контрольных интактных животных того же пола
и возраста. Концентрацию IL-7 и IL-15 определяли методом ELISA (R&D Systems, Minneapolis,
MN).
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
7271
- Prefix
-
Содержание IL-2, IL-4, IL-6, TNFα, IFNγ,
IL-17A, IL-10 определяли на проточном цитофлюориметре «FACS Calibur» с помощью CBAнабора «Mouse Th1/Th2/Th17» (BD Pharmingen,
США). Результаты выражали в пг/мл.
Определение IgE. Уровень IgE оценивали с помощью метода ELISA (BD OptEIA) микрометодом в цельной периферической крови
- Exact
-
[3]
- Suffix
-
.
Калибровочную кривую строили по чистому препарату IgE мыши. Результаты выражали в абсолютных значениях (мкг/мл).
Статистическая обработка. Статистическую
обработку результатов проводили методами непараметрической статистики с использованием
критерия U Вилкоксона–Манна–Уитни; количество животных в группах составляло от 6 до 12;
различия считали достоверными при p < 0,05
и обозначали * при с
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
8099
- Prefix
-
Развитие аутоиммунного процесса завершается формированием
иммунокомплексного гломерулонефрита у части
реципиентов к концу 3-х месяцев после трансплантации полуаллогенных клеток родительской
линии
- Exact
-
[8]
- Suffix
-
. По окончании этого срока у реципиентов измеряли концентрацию белка в моче для отнесения их в группу мышей с Th1-зависимым вариантом течения хронической РТПХ без явных
признаков патологии почек (группа nonlupus)
и в группу мышей с Th2-зависимым вариантом,
сопровождающемся формированием аутоиммунной патологии – иммунокомплексным гломерулонефритом (группа lupus).
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
8753
- Prefix
-
Формирование
гломерулонефрита тестировали по появлению
стойкой протеинурии (увеличению уровня белка в моче не менее 3 мг/мл в трех последовательных измерениях), что коррелирует с отложением
иммунных комплексов в почечной паренхиме
и морфологическими проявлениями поражения
почек
- Exact
-
[4]
- Suffix
-
. Для контроля развития РТПХ определяли массу тела, селезенки и тимуса, количество
клеток в селезенке, тимусе и периферической
крови. Данные, представленные на рисунках 1-3,
свидетельствуют о развитии хронической формы
РТПХ у реципиентов обеих групп (спленомегалия на фоне достаточно сохранного тимуса).
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
12498
- Prefix
-
Уровень IL-15 в нашем исследовании оказался ниже порога чувствительности использованного метода (100 пг/мл) . Существует ряд работ,
где определяется уровень IL-15 в периферической крови; его концентрация в сыворотке значительно варьирует в работах разных авторов –
от 1 пг/мл до 1 нг/мл
- Exact
-
[38, 49]
- Suffix
-
. Было показано
возрастание концентрации IL-15, измеренного
методом ELISA, в сыворотке больных СКВ [11].
Однако в последнее время появились новые данные о сложности определения «цитокина-невидимки» IL-15 в биологических жидкостях [46].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
12605
- Prefix
-
Существует ряд работ,
где определяется уровень IL-15 в периферической крови; его концентрация в сыворотке значительно варьирует в работах разных авторов –
от 1 пг/мл до 1 нг/мл [38, 49]. Было показано
возрастание концентрации IL-15, измеренного
методом ELISA, в сыворотке больных СКВ
- Exact
-
[11]
- Suffix
-
.
Однако в последнее время появились новые данные о сложности определения «цитокина-невидимки» IL-15 в биологических жидкостях [46].
Причина трудностей или даже невозможности
определения IL-15 связана со своеобразным механизмом его действия, который заключается
в непосредственном клеточно-контактном взаимодействии IL-15 и его рецептора с клеткой-мишенью, а также тем обстоятельством, что IL-15
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
12738
- Prefix
-
Было показано
возрастание концентрации IL-15, измеренного
методом ELISA, в сыворотке больных СКВ [11].
Однако в последнее время появились новые данные о сложности определения «цитокина-невидимки» IL-15 в биологических жидкостях
- Exact
-
[46]
- Suffix
-
.
Причина трудностей или даже невозможности
определения IL-15 связана со своеобразным механизмом его действия, который заключается
в непосредственном клеточно-контактном взаимодействии IL-15 и его рецептора с клеткой-мишенью, а также тем обстоятельством, что IL-15
образует в периферической крови мыши функциональные гетерокомплексы с растворимым
высокоаффинным рецептором IL-15ra, что препятств
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
13176
- Prefix
-
определения IL-15 связана со своеобразным механизмом его действия, который заключается
в непосредственном клеточно-контактном взаимодействии IL-15 и его рецептора с клеткой-мишенью, а также тем обстоятельством, что IL-15
образует в периферической крови мыши функциональные гетерокомплексы с растворимым
высокоаффинным рецептором IL-15ra, что препятствует выявлению IL-15 методом ELISA
- Exact
-
[16]
- Suffix
-
.
Определение содержания IgE
Существуют многочисленные данные об однозначной прямой корреляции между уровнем
IgE и продукцией IL-4 в организме, что может
позволить косвенно судить о продукции этого
цитокина в организме по концентрации общего
IgE в периферической крови при ответе на различные воздействия, не связанные с образованием специфического IgE [41, 44, 45].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
13535
- Prefix
-
Определение содержания IgE
Существуют многочисленные данные об однозначной прямой корреляции между уровнем
IgE и продукцией IL-4 в организме, что может
позволить косвенно судить о продукции этого
цитокина в организме по концентрации общего
IgE в периферической крови при ответе на различные воздействия, не связанные с образованием специфического IgE
- Exact
-
[41, 44, 45]
- Suffix
-
. Так как при
определении концентрации IL-4 в сыворотке значения у части животных оказались ниже уровня
чувствительности использованного метода, мы
использовали косвенную оценку продукции IL-4
по содержанию общего IgE.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
14997
- Prefix
-
Первое событие, следующее за этим, – активация продукции IL-2, уровень которого достигает максимума через 24-48 часов после индукции
реакции, причем в продукции этого цитокина
участвуют и Th-клетки хозяина
- Exact
-
[17, 21, 22, 23]
- Suffix
-
.
Через 2 дня на фоне резкого повышения mRNA
IL-2 в T-лимфоцитах начинается подъем mRNA
IL-10 и IL-4, который держится в течение недели,
в то время как mRNA IL-2 снижается [40]. Продукция IL-4 имеет большое значение для обеих форм РТПХ, несмотря на ярко выраженную
связь острой РТПХ с активацией Th1-клеток:
в отсутствие IL-4 реакция не развивается [36,
40].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
15185
- Prefix
-
событие, следующее за этим, – активация продукции IL-2, уровень которого достигает максимума через 24-48 часов после индукции
реакции, причем в продукции этого цитокина
участвуют и Th-клетки хозяина [17, 21, 22, 23].
Через 2 дня на фоне резкого повышения mRNA
IL-2 в T-лимфоцитах начинается подъем mRNA
IL-10 и IL-4, который держится в течение недели,
в то время как mRNA IL-2 снижается
- Exact
-
[40]
- Suffix
-
. Продукция IL-4 имеет большое значение для обеих форм РТПХ, несмотря на ярко выраженную
связь острой РТПХ с активацией Th1-клеток:
в отсутствие IL-4 реакция не развивается [36,
40]. Развитие в дальнейшем той или иной формы
РТПХ определяется в первую неделю после переТаблица 1.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
15364
- Prefix
-
Через 2 дня на фоне резкого повышения mRNA
IL-2 в T-лимфоцитах начинается подъем mRNA
IL-10 и IL-4, который держится в течение недели,
в то время как mRNA IL-2 снижается [40]. Продукция IL-4 имеет большое значение для обеих форм РТПХ, несмотря на ярко выраженную
связь острой РТПХ с активацией Th1-клеток:
в отсутствие IL-4 реакция не развивается
- Exact
-
[36,
40]
- Suffix
-
. Развитие в дальнейшем той или иной формы
РТПХ определяется в первую неделю после переТаблица 1. КонценТРация циТоКинов
в сывоРоТКе РециПиенТов с ХРоничесКой РТПХ
(M; min-max); пг/мл
IL-2IL-6TNFα
Контроль
n = 7
2,3
(2,0-2,6)
4,4
(1,6-9,5)
7,9
(6,0-10,2)
Nonlupus
n = 7
2,6
(2,0-2,9)
2,3
(0-4,8)
9,03
(0-15,7)
Lupus
n = 8
2,9
(2,3-3,6)
8,9#
(0-17,4)
19,1*#
(7,1-40,6)
0
50
100
150
200
250
300
0
50
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
16230
- Prefix
-
Концентрация IgE в периферической крови
реципиентов в динамике развития хронической РТПХ
носа, сопровождается активацией разных субпопуляций лимфоцитов и характеризуется участием
разных иммунорегуляторных молекул
- Exact
-
[47]
- Suffix
-
.
Хотя формирование nonlupus- или lupusвариантов в полуаллогенной модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 сопровождается
преимущественным доминированием соответственно Th1- или Th2-зависимых процессов [1,
3, 6], с первой недели у всех реципиентов наблюдается резкая стимуляция продукции IgE.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
16427
- Prefix
-
в периферической крови
реципиентов в динамике развития хронической РТПХ
носа, сопровождается активацией разных субпопуляций лимфоцитов и характеризуется участием
разных иммунорегуляторных молекул [47].
Хотя формирование nonlupus- или lupusвариантов в полуаллогенной модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 сопровождается
преимущественным доминированием соответственно Th1- или Th2-зависимых процессов
- Exact
-
[1,
3, 6]
- Suffix
-
, с первой недели у всех реципиентов наблюдается резкая стимуляция продукции IgE. Через
определенный промежуток времени начинает обнаруживаться разница в уровне IgE между
lupus- и nonlupus-реципиентами, которая становится достоверной при окончательном формировании патофизиологических исходов.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
16841
- Prefix
-
Через
определенный промежуток времени начинает обнаруживаться разница в уровне IgE между
lupus- и nonlupus-реципиентами, которая становится достоверной при окончательном формировании патофизиологических исходов. Опираясь на многочисленные данные об однозначной
прямой корреляции между концентрацией IgE
и уровнем IL-4
- Exact
-
[41, 44, 45]
- Suffix
-
, можно сделать заключение о выраженной продукции IL-4 при Th1-
и Th2-зависимых вариантах хронической РТПХ,
которая продолжается на протяжении всего периода наблюдения, но только при достижении
относительно более высоких значений у lupusреципиентов сопровождается формированием
аутоиммунной патологии.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
18037
- Prefix
-
Поликлональная активация В лимфоцитов сопровождается появлением антител к различным
компонентам собственных тканей, при этом
аутоантитела при хронической РТПХ представлены иммуноглобулинами класса IgG, в отличие от аутоантител, определяемых в низком
титре у интактных животных и относящихся
преимущественно к классу IgM
- Exact
-
[27, 35]
- Suffix
-
. Считается, что именно активная продукция таких
аутоантител и приводит к развитию аутоиммунной патологии в использованной нами модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 и в других аналогичных моделях. В частности, показано, что аутоантитела к ДНК играют патогенетическую роль
при формировании иммунокомплексного гломерулонефрита и служат диагностическим признаком развития системной красной волчанки
(СКВ),
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
18591
- Prefix
-
В частности, показано, что аутоантитела к ДНК играют патогенетическую роль
при формировании иммунокомплексного гломерулонефрита и служат диагностическим признаком развития системной красной волчанки
(СКВ), хотя прямая корреляция между уровнем
аутоантител различной специфичности, в том
числе и к ДНК, и развитием аутоиммунной патологии отсутствует
- Exact
-
[9, 31, 33, 48]
- Suffix
-
. Повышенные
концентрации IL-6 и TNFα также могут поддерживать это активированное состояние В-клеток.
Так, показано, что при СКВ, в качестве модели
которой рассматривают иммунокомплексный
гломерулонефрит в исследуемой нами системе,
определяются повышенные уровни IL-6 и IL-10
и их тесная корреляция с активностью заболевания [19].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
18933
- Prefix
-
Так, показано, что при СКВ, в качестве модели
которой рассматривают иммунокомплексный
гломерулонефрит в исследуемой нами системе,
определяются повышенные уровни IL-6 и IL-10
и их тесная корреляция с активностью заболевания
- Exact
-
[19]
- Suffix
-
. В настоящее время признана двойственная роль IL-6 как про- и противовоспалительного
цитокина. IL-6 участвует в развитии острой фазы
воспаления, но также в процессах дифференцировки В-лимфоцитов.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
19344
- Prefix
-
Более того, показано,
что IL-6 может сдвигать соотношение Th1/Th2
в сторону Th2, индуцируя IL-4-зависимую дифференцировку Th2-лимфоцитов и одновременно
ингибируя Th1-клетки по независимому от IL-4
механизму
- Exact
-
[20]
- Suffix
-
. TNFα также является мультифункциональным цитокином и вовлекается
в различные иммунные процессы. Кроме хорошо
известных провоспалительных эффектов TNFα
действует как важный фактор физиологических
процессов роста и активации В клеток.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
19661
- Prefix
-
Кроме хорошо
известных провоспалительных эффектов TNFα
действует как важный фактор физиологических
процессов роста и активации В клеток. Его уровень повышен в периферической крови и в ткани
почек у пациентов с СКВ
- Exact
-
[12]
- Suffix
-
, хотя роль TNFα
в развитии СКВ у человека неоднозначна [13,
50]. Содержание IL-6 и TNFα в крови nonlupusреципиентов с Th1-зависимым вариантом развития хронической РТПХ остается на уровне, достоверно не отличающемся от соответствующих
значений у интактных животных.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
19720
- Prefix
-
Кроме хорошо
известных провоспалительных эффектов TNFα
действует как важный фактор физиологических
процессов роста и активации В клеток. Его уровень повышен в периферической крови и в ткани
почек у пациентов с СКВ [12], хотя роль TNFα
в развитии СКВ у человека неоднозначна
- Exact
-
[13,
50]
- Suffix
-
. Содержание IL-6 и TNFα в крови nonlupusреципиентов с Th1-зависимым вариантом развития хронической РТПХ остается на уровне, достоверно не отличающемся от соответствующих
значений у интактных животных.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
20913
- Prefix
-
Гомеостатическая пролиферация приводит к снижению разнообразия
антигенраспознающих рецепторов лимфоцитов,
накоплению аутоагрессивных клеток и в настоящее время рассматривается как возможный
механизм срыва толерантности к компонентам
собственных тканей
- Exact
-
[14, 26, 32, 43]
- Suffix
-
. На использованной нами модели было показано, что у мышей с иммунокомплексным гломерулонефритом
наблюдается возрастание субпопуляций Т клеток
с фенотипом клеток памяти, что также является
характерной чертой процесса гомеостатической
пролиферации, который, таким образом, может
быть одним из механизмов формирования аутоиммунной патологии при Th2-зависимом варианте хронической РТПХ [2].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
21359
- Prefix
-
На использованной нами модели было показано, что у мышей с иммунокомплексным гломерулонефритом
наблюдается возрастание субпопуляций Т клеток
с фенотипом клеток памяти, что также является
характерной чертой процесса гомеостатической
пролиферации, который, таким образом, может
быть одним из механизмов формирования аутоиммунной патологии при Th2-зависимом варианте хронической РТПХ
- Exact
-
[2]
- Suffix
-
.
Развитие хронической РТПХ в модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 сопровождается
выраженным подавлением способности реципиентов отвечать на Т-зависимый антиген продукцией специфических антител; особенно резко снижается первичный IgG-ответ [3, 24, 28].
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
21598
- Prefix
-
Развитие хронической РТПХ в модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 сопровождается
выраженным подавлением способности реципиентов отвечать на Т-зависимый антиген продукцией специфических антител; особенно резко снижается первичный IgG-ответ
- Exact
-
[3, 24, 28]
- Suffix
-
.
Эффект проявляется у всех реципиентов и более
выражен в группе nonlupus [7]. Выявление повышенного содержания цитокинов, несомненно
участвующих в регуляции гуморального иммунного ответа, не дает удовлетворительного объяснения такой иммунодепрессии реципиентов
и требует проведения дальнейших исследований.
- (check this in PDF content)
-
- Start
-
21683
- Prefix
-
Развитие хронической РТПХ в модели
DBA/2→(C57Bl/6xDBA/2)F1 сопровождается
выраженным подавлением способности реципиентов отвечать на Т-зависимый антиген продукцией специфических антител; особенно резко снижается первичный IgG-ответ [3, 24, 28].
Эффект проявляется у всех реципиентов и более
выражен в группе nonlupus
- Exact
-
[7]
- Suffix
-
. Выявление повышенного содержания цитокинов, несомненно
участвующих в регуляции гуморального иммунного ответа, не дает удовлетворительного объяснения такой иммунодепрессии реципиентов
и требует проведения дальнейших исследований.
- (check this in PDF content)